用多波长吸收单通道同步测量多种酶活性的方法

摘要

本发明公开了一种用多波长吸收单通道同步测量多种酶活性的方法；基于光吸收线性加和性及酶显色底物与其对应显色产物的等吸收波长，建立多波长吸收同步测量单通道同步测定多种酶活性所需显色底物组合设计原理及消除吸收光谱重叠干扰的数据处理方法，并以数值积分的速度方程分析酶反应过程测定最大反应速度消除各种底物及产物对待测酶活性的干扰，使单通道同步测定多种酶活性的范围及检测限都与单独测定时相当；该方法可用于同步测定生物样品多种酶活性、酶标记免疫分析同步测定多组分含量、同步筛选不同靶酶的抑制剂，可用于临床生化分析和临床免疫检验、卫生检验、酶抑制剂筛选等常规实践，也可用于这类酶法分析技术适用的各种基础研究。

主权项

一种用多波长吸收单通道同步测量多种酶活性的方法，其特征在于：包括下列步骤： a.确定用多波长吸收单通道同步测定多种酶活性所需显色底物组合： a1根据待测酶的专一性筛选满足下列条件的显色底物组合：所选显色团能分别用于制备待测酶的显色底物；所得这些显色底物组合中，将显色底物在对应待测酶作用下所得显色产物相对该显色底物的差吸收峰最大波长从大到小排列，相邻的显色产物差吸收峰最大波长之间相距大于30nm且尽量远；在按显色产物差吸收峰最大波长从大到小的排列中，除了显色产物差吸收峰最靠近红外端的显色底物外，每个显色底物在对应酶作用下所得显色产物差吸收峰最大波长，都与此排列中某个显色底物的最大等吸收波长相差小于25nm且尽量短； a2用步骤a1所选显色团分别合成待测酶的对应显色底物并组合使用； b.在一个反应混合物或酶反应体系即单反应通道中，同步启动多个待测酶针对组合使用的显色底物混合物对应显色底物的专一催化反应； c.选择测量波长组合：以显色产物差吸收峰最靠近红外端的显色底物为显色底物A，在显色底物A的显色产物差吸收峰最大波长下测定该显色产物吸收；在显色底物A的等吸收波长处测定其余待测酶显色产物或显色底物的吸收； d.在所选多个测量波长组合下，通过快速变换测量波长，多波长吸收同步测量实现同步跟踪单通道中多个待测酶的反应过程； e.基于无相互作用物质吸收的线性加和性建立消除反应通道中显色物质吸收重叠干扰的数据处理方法，获得消除吸收光谱重叠干扰后每个待测酶的显色产物或显色底物无干扰吸收变化曲线；如某个待测酶不受反应体系其它酶的产物及底物的干扰且其底物浓度在对应酶米氏常数的3倍以上，用经典初速度法分析其显色产物或显色底物无干扰吸收变化曲线确定初速度；如某个待测酶不受反应体系其它酶的产物及底物的干扰但所用显色底物浓度在该酶米氏常数的5％以上而低于米氏常数的3倍，联用经典初速度法和反应过程分析法分析其显色产物或显色底物无干扰吸收变化曲线确定初速度；当某个待测酶受反应体系中其自身和/或其它酶的底物和/或产物的干扰时，将描述反应体系动力学的微分速度方程组数值积分后分析活性受到干扰待测酶反应的显色产物或显色底物无干扰吸收变化曲线，确定其最大反应速度表示其活性，或据其微分速度方程和所得最大反应速度换算成底物浓度为起始底物浓度93％时初速度表示该待测酶的活性。