基于谷氨酸合酶的工程菌及其实现方法

摘要

本发明涉及基因工程技术领域的谷氨酸合酶的工程菌及其实现方法，以灰略红链霉菌基因组DNA为模板，与含有酶切位点的引物进行PCR扩增依次得到编码谷氨酸合酶小亚基及大亚基的核苷酸序列；然后将扩增得到的基因序列依次连接到共表达载体pETDuet‐1，最终获得重组共表达载体pETDuet‐GG‐GF；之后将该谷氨酸合酶表达载体转化到大肠杆菌表达菌株。本发明针对现有技术存在的由于谷氨酸合酶在生物体内多为胞内酶且表达量较低导致的应用范围和效果严重受限等不足，应用基因工程手段实现其体外的大量表达合成，此外本发明通过在重组蛋白添加聚组氨酸标签的方法，方便了后期蛋白的纯化。

主权项

一种谷氨酸合酶的工程菌，其特征在于，该工程菌为外源表达谷氨酸合酶的大肠杆菌；所述的胞内谷氨酸合酶具体为灰略红链霉菌(Streptomyces griseorubens)JSD‐1谷氨酸合酶编码基因，由谷氨酸合酶大亚基和小亚基构成，其中：谷氨酸合酶大亚基SG‐GF的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，谷氨酸合酶小亚基SG‐GG的核苷酸如SEQ ID No.2所示，分别编码1503和496个氨基酸。