主权项 |
用于相对定量样品中至少一种靶核酸的方法,其包括以下步骤:(a) 包含在样品中的至少一种靶核酸中的每一种的扩增和同时获得与至少一种靶核酸中的每一种的扩增相关的信号,(b) 对比用核酸的至少一种样品中的每一种的扩增和同时获得与至少一种对比用核酸中的每一种的扩增相关的信号,(c) 由于将背景项从记录的信号中减去,获得的信号对背景信号做修正,(d) 靶和对比用核酸的每一个扩增循环的循环到循环扩增效率Ê(C)的计算,其中使用如下等式计算循环到循环扩增效率Ê:Ê(C) = [Ĩ(C+1) / Ĩ(C)] – 1其中‑ Ê =循环到循环扩增效率‑ C =循环数‑ Ĩ =对背景信号做修正的信号强度,(e) 靶和对比用核酸的循环到循环扩增效率Ê(C)的随机性的量度M的计算,其中计算的随机性的量度选自:谱熵、多项式曲线拟合的剩余误差、零交点计数、高通滤波后的能量(RMS)计算,(f) 循环数C<sub>M</sub>的确定,其中M对于靶和对比用核酸具有其最小值,(g) 从C<sub>M</sub>值中计算特征性循环数C<sub>C</sub>,以对在计算随机性的量度中使用的任何窗口的宽度做修正,(h) 通过比较靶和对比用样品的C<sub>C</sub>,与对比用核酸相比,确定样品中至少一种靶核酸中的每一种的相对量。 |