一种改良共变性荧光原位杂交方法

摘要

本发明涉及一种荧光原位杂交技术，公开了一种改良共变性荧光原位杂交方法，包括制备玻片标本、探针与染色体共变性和杂交、杂交后洗涤并染色和信号检测。本发明在现有技术的基础上，采用探针与染色体共变性和杂交的方法，操作简单，缩减了反应步骤，缩短了实验时间，且不需要使用有毒致畸的变性剂，降低了实验成本，避免了变性剂对实验操作人员和环境的危害，提供了一种定位准确、灵敏度高、实验效率高，稳定性好，操作简单，环境友好的改良共变性荧光原位杂交方法。

主权项

一种改良共变性荧光原位杂交方法，其特征在于：步骤一制备玻片标本：样品经过EDTA‑胰酶消化、低渗液处理、固定液固定处理后，滴片并烘烤，制得玻片标本；步骤二探针与染色体共变性和杂交：在玻片标本上，滴加探针，加盖盖玻片后，封盖盖玻片与载玻片间的交界缝，烘烤玻片标本，使探针与样品染色体共变性，共变性完成后，将玻片标本置于湿盒中孵育；步骤三杂交后洗涤并染色：孵育完成后，取出玻片标本，移除封盖盖玻片与载玻片间交界缝的胶水，用SSC洗涤液洗涤玻片标本后，染色处理；步骤四信号检测：用荧光显微镜检测玻片标本；其中，步骤二中，玻片标本的共变性温度为73～75℃，共变性时间为40秒～2分钟，孵育温度为36～38℃，孵育时间为8～16小时。