一种苦荞麦凝集素的制备方法和应用

摘要

本发明提供了一种苦荞麦凝集素(Tartaty Buckwheat Lectin，TBL)的制备方法，以及该蛋白在制备抗肿瘤药物中的应用。其制备方法是将苦荞麦种子粉碎，加入蛋白提取液低温提取，随后加入硫酸铵沉淀蛋白，再经过脱盐,离子交换层析等步骤获得纯的苦荞麦凝集素蛋白。本发明提供的苦荞麦凝集素，可以特异性地杀伤结直肠癌细胞，并且抑制肿瘤的增殖和转移，可以应用在抗肿瘤药物中。

主权项

一种苦荞麦凝集素，其特征在于，通过如下方法制得：将烘干的苦荞麦种子，脱壳粉碎后，然后按每克荞麦粉加入10‑15mL pH4.0‑pH5.0的醋酸盐缓冲液，4℃抽提4‑24小时，8000rpm离心20分钟除去沉淀，收集上清；将上清用纱布过滤，除去麸皮，在上清中加入硫酸铵，至80％的饱和度，在4℃搅拌4小时；8000rpm离心30分钟，收集沉淀；用少量pH7.0的PBS缓冲液重新溶解沉淀，上样于脱盐柱，除去硫酸铵，收集蛋白峰得到荞麦蛋白粗提物；将粗提物上样于HiTrap^TM DEAE FF弱阴离子交换柱进行分离纯化，收集洗脱峰，将收集的洗脱峰蛋白样品再次上样于脱盐柱，收集蛋白峰，真空冷冻干燥，得到该分子量为62kD的苦荞麦凝集素。