一种蛋白质样品原位快速预处理方法

摘要

本发明涉及一种蛋白质样品原位快速预处理方法，于离心超滤装置内原位进行蛋白质样品的整个预处理过程，集成了蛋白质样品变性、还原、溶剂置换、烷基化、酶解及杂质去除过程，并采用微波辅助加速蛋白质样品的酶解。该方法可显著提高蛋白质样品预处理的通量，同时，整个样品预处理过程原位进行，回收率高。此外，离心超滤装置的使用可方便、快捷地实现样品的纯化及溶剂的置换，酶解产物无需额外的纯化过程，可直接与后续的高效液相色谱分离-质谱鉴定联用。

主权项

一种蛋白质样品原位快速预处理方法，其特征在于：整个蛋白质样品预处理过程，包括蛋白质样品的变性、还原、溶剂置换、烷基化、酶解及杂质去除过程，皆在离心超滤装置中原位进行，具体包括：（1）采用pH为1‑6.5的酸性溶液或pH为7.5‑14的溶有体积浓度为1%‑30%的表面活性剂或去垢剂的碱性溶液溶解蛋白质样品，将样品溶液加入至离心超滤装置的超滤管中实现蛋白质的原位富集；（2）蛋白质样品溶液经步骤（1）处理后，若蛋白质样品后续还原过程所需溶液体系环境与蛋白质样品溶解液体系环境所需酸碱环境不同，则需进行pH置换，即将离心超滤装置离心后向超滤管中加入pH为蛋白质样品还原过程所需pH范围的溶液；若后续蛋白质样品还原过程所需溶液体系环境与蛋白质样品溶解液体系环境所需酸碱环境相同，则不需要进行pH置换。（3）向步骤（2）中处理的样品溶液中加入还原剂，同时进行蛋白质样品的变性及还原过程；（4）将步骤（3）中处理的样品溶液经离心后，向超滤管中加入pH为7.5‑14的碱性缓冲溶液或水溶液并离心，实现杂质的去除；（5）向步骤（4）中离心后的超滤管中加入以pH为7.5‑9的碱性缓冲溶液为溶剂配制的烷基化溶液及胰蛋白酶溶液后，将样品转入至盛有水的微波盒，并将微波盒转入至微波炉中，采用微波水浴辅助方法同时进行烷基化及酶解过程；（6）酶解完成后，将离心超滤装置进行离心，保留离心超滤装置的收集管内所得溶液；向超滤管中加入蒸馏水，将离心超滤装置进行离心，保留收集管内所得溶液，将两次收集管中所得溶液混合，即为所需的蛋白质酶解产物。