芝麻栽培种与Sesamum radiatum野生种远缘杂交后代的分子鉴定方法

摘要

本发明公开了一种芝麻栽培种与Sesamum radiatum野生种远缘杂交后代的分子鉴定方法，属生物技术领域。通过提取栽培种（Sesamum indicum L.,2n=26）、野生种（Sesamum radiatum,2n=64）及杂交后代F₁的基因组DNA，进行PCR扩增和凝胶电泳检测，根据是否能够同时扩增出亲本的特异性条带判定远缘杂交F₁代的真假。本发明建立的芝麻远缘杂交后代的分子鉴定方法，解决了芝麻远缘杂交育种研究过程中的远缘杂种鉴定周期长、准确率低等难题，填补了我国芝麻远缘杂交育种技术的空白。利用该方法可以高效快速地鉴定芝麻远缘杂交后代F₁，为芝麻抗病新品种育种奠定了材料和技术基础。

主权项

芝麻栽培种与Sesamum radiatum野生种远缘杂交后代的分子鉴定方法，其特征在于，具体步骤如下：（1）挑选饱满健康的芝麻栽培种与Sesamum radiatum野生种种子，6月播种后于7月下旬植株进入花期，进行人工授粉杂交，采用组织培养方法对杂交后代幼胚进行培养，获得远缘杂交F₁后代；（2）提取步骤（1）中芝麻栽培种、Sesamum radiatum野生种及杂交后代F₁基因组DNA，作为模板备用；（3）将步骤（2）提取的DNA模板应用于PCR反应体系，运行PCR扩增程序，在引物对HS209的引导下，得到PCR反应产物；（4）将步骤（3）的PCR反应产物进行凝胶电泳检测，检测结果有栽培种特异性条带210bp和野生种特异性条带200bp及230bp的为真杂种；其余则为假杂种；所述的引物对HS209为：正向引物序列：5’‑GCAAGAAGCCGACATGTTTA‑3’，反向引物序列：5’‑ACTCCAATTCCTCCACCAAG‑3’；所述的PCR反应体系为：DNA模版50ng，10×Buffer1μL，10mmol·L^‑1dNTPs0.2μL，10μg·L^‑1引物对HS2091μL，2.5U·μL^‑1Taq DNA聚合酶0.5μL，加入无菌超纯水至终体积10μL；所述的PCR扩增程序为：94℃变性3min，94℃变性1min，58℃退火45s，72℃延伸60s，30个循环，72℃总延伸10min；4℃保存。