血浆中肌苷含量的测定方法

摘要

本发明公开了一种测定人体血浆中肌苷含量的方法，它包括如下步骤：（a）在人体空白血浆250ul中加入肌苷标准品溶液25ul，配制成至少五份不同浓度的肌苷血浆溶液，再分别加入0.1ug/ml拉米夫定标准液25ul和4.25%磷酸溶液250ul，涡流混合，得混合溶液；将所述混合溶液分别加入经活化的HLB固相萃取柱中进行洗脱，弃洗脱液，再用1ml流动相溶液洗脱，收集洗脱液，离心，取上清液；（b）将经步骤（a）制得的上清液在特定的质谱和色谱条件下进行LC/MS/MS分析；（c）基于步骤（b）的分析结果，用同样的方法建立当日的标准曲线及定量下限进行计算，得到待测人体血浆中的肌苷含量。

主权项

一种建立人体血浆肌苷LC/MS/MS测定标准曲线及定量下限的方法，其特征在于，它包括如下步骤： (a)在人体空白血浆250μl中加入肌苷标准品溶液25μl，配制成至少五份不同浓度的肌苷血浆溶液，再分别加入0.1μg/ml拉米夫定标准液25μl和4.25％磷酸溶液250μl，涡流混合，得至少五份混合溶液；将所述混合溶液分别加入经活化的HLB固相萃取柱中进行洗脱，弃洗脱液，再用1ml流动相溶液50mM CH₃COONH₂:CH₃OH＝1:1洗脱，收集洗脱液，离心，取上清液； (b)将经步骤(a)制得的上清液在下述条件下进行LC/MS/MS分析 质谱条件： 化合物参数： 肌苷母子离子对：269.1/137.1，time:400msec 拉米夫定母子离子对：230.2/112.2，time:200msec Duration：4min Cycles：393 DP＝26V CE＝15V CXP＝4V CEP＝4V Q1resolution：Unit Q2resolution：Unit， 离子源/气参数： Ion Source：Turbo Spray Curtain Gas(CUR)：10psig Collision Gas(CAD)：Medium Ion Spray Voltage(IS)：5000V Temperature(TEM)：700℃ Ion Source Gas1(Gas1)：60psig Ion Source Gas2(Gas2)：10psig Interface Heater(ihe)：ON， 液相色谱条件： 色谱柱：Waters XBridge^TM C18，规格：3.5μm，2.1mm×100mm，Part No.:186003022，S/N:01453030814045 流动相：50mM CH₃COONH₂:CH₃OH＝1:1 流速：0.2ml/min 进样量：10μl 进样时间：4min； (c)基于步骤(b)的分析结果，建立人体血浆肌苷LC/MS/MS测定的标准曲线及定量下限。