主权项 |
一种贵州半蒴苣苔组织培养快速繁殖方法,其特征在于该方法包括以下步骤:(1)外植体的选择与消毒:取贵州半蒴苣苔顶芽作为外植体,依次用2%洗洁精水溶液浸泡5‑10min、线状自来水冲洗10‑20min、添加2‑3滴吐温‑20的100 ml0.1%升汞消毒7‑9min、无菌水冲洗3‑5次,最后用灭菌滤纸吸去表面水分,剪成长约1cm长的外植体;(2)顶芽分化获得丛生芽培养:将步骤(1)得到的外植体接种到MS培养基中,在培养温度为23‑26℃、光照强度1500lux、光照时间为10‑12小时/天的条件下培养25‑30天,顶芽分化后获得丛生芽,其中MS培养基中含0.5‑1.5mg/L的6‑BA、0.5‑1.0mg/L的NAA、25‑30g/L蔗糖和4.0‑4.5g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8;(3)丛生芽壮苗继代培养:将步骤(2)中得到的试管苗不定芽置于MS增殖培养基中,在培养温度23‑26℃、光照强度1500lux、光照时间为10‑12小时/天的条件下培养20‑25天得到完整的健壮植株,其中MS壮苗培养基中含1.0‑2.0mg/L的6‑BA、0.5‑1.0mg/L的NAA、0.5‑1.0mg/L KT,25‑30g/L蔗糖和4.0‑4.5g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8;(4)丛生芽生根培养:将步骤(3)中得到的健壮植株置于MS生根培养基中,在培养温度23‑26℃、光照强度1500lux、光照时间为10‑12小时/天的条件下培养25‑30天得到带根的完整植株,其中MS生根培养基中含1.0‑1.5mg/L的IAA、0.5 mg/L的ABT、25‑30g/L蔗糖和4.0‑4.5g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8;(5)炼苗与移栽:步骤(4)获得带根的完整植株后,在室温为25℃的室内散射光照射2‑4天,打开瓶盖,在瓶中加入少量自来水,炼苗2‑4天,表面角质形成后将苗取出,洗净根部培养基,立即移栽到通风良好且弱光石灰岩土壤中,在石灰岩土壤中生长一个半月后移栽大田。 |