一种新型真菌蛋白酶及其用途

摘要

本发明涉及一种真菌丝氨酸蛋白酶，其包含成熟Fe_RF6318酶的氨基酸序列，所述成熟Fe_RF6318酶具有SEQ ID NO：15的氨基酸序列。所述丝氨酸蛋白酶可自木贼镰孢获得，更优选来自保藏菌株CBS 119568。公开的还有编码所述蛋白酶的核酸序列，例如保藏在检索号为DSM 22171的大肠杆菌RF7664中的包含核苷酸序列SEQ ID NO：9的质粒pALK2521，以及保藏在检索号为DSM 22172的大肠杆菌RF7800中的包含全长基因SEQ ID NO：10的质粒pALK2529。所述蛋白酶可用作酶制剂，其可应用于洗涤剂组合物以及用于处理纤维、用于处理毛织品、用于处理毛发、用于处理皮革、用于处理食品或饲料或用于涉及修饰、降解或去除蛋白质材料的任何应用。

主权项

一种真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶具有丝氨酸蛋白酶活性，并由如SEQ ID NO: 15定义的成熟Fe_RF6318酶的氨基酸序列组成。2. 根据权利要求1的真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶可自木贼镰孢(Fusariumequiseti)获得。3. 根据权利要求1或2的真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶的成熟形式具有在20‑35 kDa之间的分子质量。4. 根据权利要求1或2的真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于，在pH 9使用15 min反应时间以及酪蛋白作为底物，所述酶的最适温度为50℃‑60℃。5. 根据权利要求1或2的真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于，在50℃使用15 min反应时间以及酪蛋白作为底物，所述酶的最适pH在pH 9‑pH 10的pH范围。6. 根据权利要求1或2的真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于，在存在洗涤剂的情况下于10℃‑60℃之间，所述酶能够降解和去除蛋白质污迹。7. 根据权利要求1或2的真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶由分离的多核苷酸序列编码，所述多核苷酸序列在严格条件下与包含在质粒pALK2521中的多核苷酸序列杂交，所述质粒包含核苷酸序列SEQ ID NO: 9，保藏在检索号为DSM 22171的大肠杆菌RF7664中。8. 根据权利要求1或2的真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶由分离的核酸分子编码，所述核酸分子编码由在SEQ ID NO: 15中表征的氨基酸序列组成的多肽。9. 根据权利要求1或2的真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶由由核苷酸序列SEQ ID NO: 14组成的分离核酸分子编码。10. 根据权利要求1或2的真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶由包含在pALK2529中的多核苷酸序列编码，pALK2529保藏在检索号为DSM 22172的大肠杆菌RF7800中。11. 根据权利要求1或2的真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶由重组表达载体产生，所述重组表达载体包含编码根据权利要求1‑10中任一项的真菌丝氨酸蛋白酶的核酸分子，所述核酸分子可操作地连接到能够在适宜宿主中指导丝氨酸蛋白酶编码基因表达的调控序列。12. 根据权利要求1或2的真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶在异源宿主中产生。13. 根据权利要求1或2的真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶在微生物宿主中产生。14. 根据权利要求1或2的真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶在下列属的宿主中产生：木霉、曲霉、镰孢、腐质霉、金孢子菌、脉孢菌、根霉、青霉和被孢霉。15. 根据权利要求14的真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶在木霉或曲霉中产生。16. 根据权利要求15的真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶在里氏木霉(T. reesei)中产生。17. 一种编码真菌丝氨酸蛋白酶的分离核酸分子，所述核酸分子选自：(a) 以下核酸分子，其编码具有丝氨酸蛋白酶活性并由如SEQ ID NO: 15所述的氨基酸序列组成的多肽；(b) 以下核酸分子，其由如SEQ ID NO: 10所述的核苷酸序列的编码序列组成；(c) 由多核苷酸序列的编码序列组成的核酸分子，所述多核苷酸序列包含于DSM 22172中；和(d) 以下核酸分子，其编码序列由于遗传密码的简并性而与(b)‑(c)的任一核酸分子的编码序列不同。18. 一种包含根据权利要求17的核酸分子的重组表达载体，所述核酸分子可操作地连接到能够在适宜宿主中指导所述丝氨酸蛋白酶编码基因表达的调控序列。19. 一种宿主细胞，所述宿主细胞包含根据权利要求18的重组表达载体。20. 根据权利要求19的宿主细胞，其特征在于，所述宿主为微生物宿主。21. 根据权利要求19或20的宿主细胞，其特征在于，所述宿主为丝状真菌。22. 根据权利要求19或20的宿主细胞，其特征在于，所述宿主为下列属的宿主：木霉、曲霉、镰孢、腐质霉、金孢子菌、脉孢菌、根霉、青霉和被孢霉。23. 根据权利要求22的宿主细胞，其特征在于，所述宿主为木霉或曲霉。24. 根据权利要求23的宿主细胞，其特征在于，所述宿主为里氏木霉。25. 一种产生具有丝氨酸蛋白酶活性的多肽的方法，所述方法包括以下步骤：培养根据权利要求19‑24中任一项的宿主细胞和回收所述多肽。26. 一种具有丝氨酸蛋白酶活性的多肽，所述多肽由根据权利要求17的核酸分子编码，并且可通过根据权利要求25的方法获得。27. 一种用于获得酶制剂的方法，所述酶制剂包含具有丝氨酸蛋白酶活性的多肽，所述方法包括以下步骤：培养根据权利要求19‑24中任一项的宿主细胞，和自所述宿主细胞回收多肽或从培养基中分离所述宿主细胞以及获得上清液。28. 一种酶制剂，所述酶制剂通过根据权利要求27的方法获得。29. 一种酶制剂，所述酶制剂包含根据权利要求1‑16中任一项的真菌丝氨酸蛋白酶。30. 根据权利要求28或29的酶制剂，其特征在于，所述制剂包含选自下列含或不含介质的其它酶：蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶、脂肪酶、木聚糖酶、甘露聚糖酶、角质酶、果胶酶或氧化酶。31. 根据权利要求28或29的酶制剂，其特征在于，所述制剂包含选自下列的适宜添加剂：稳定剂、缓冲剂、表面活性剂、增效剂、漂白剂、介质、防蚀剂、抗再沉积剂、腐蚀剂、研磨剂、荧光增白剂、染剂、色素和防腐剂。32. 根据权利要求28或29的酶制剂，其特征在于，所述酶制剂呈液体、粉末或颗粒形式。33. 根据权利要求1‑16中任一项的真菌丝氨酸蛋白酶或根据权利要求28‑32中任一项的酶制剂在洗涤剂、处理纤维、处理毛织品、处理毛发、处理皮革、处理食物或饲料或涉及修饰、降解或去除蛋白质材料的应用中的用途。34. 根据权利要求1‑16中任一项的真菌丝氨酸蛋白酶或根据权利要求28‑32中任一项的酶制剂作为除垢添加剂的用途。35. 在洗涤液中的根据权利要求34的用途。36. 在洗涤粉中的根据权利要求34的用途。