发明名称 |
一种用于检测EGFR基因热点突变的试剂盒及其检测方法 |
摘要 |
本发明属于生物技术领域,公开了一种用于检测EGFR基因热点突变的试剂盒及其检测方法。本发明试剂盒包含PNA试剂,利用钳夹技术封闭野生型EGFR基因序列,从而提高sanger测序法的灵敏度和EGFR基因突变的检出率。本发明检测方法操作简单、安全,不需要较多昂贵试剂的使用,经济高效;同时还具有操作时间短的优点,整个检测过程可在4~6小时内完成。 |
申请公布号 |
CN103484551B |
申请公布日期 |
2014.08.27 |
申请号 |
CN201310469439.4 |
申请日期 |
2013.10.09 |
申请人 |
武汉百泰基因工程有限公司 |
发明人 |
叶伦;林佳;李品 |
分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
主分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
代理机构 |
湖北武汉永嘉专利代理有限公司 42102 |
代理人 |
邬丽明 |
主权项 |
一种用于检测EGFR基因热点突变的试剂盒,其特征在于,包括PCR反应液、PCR引物、探针、PNA试剂、酶消化液、测序反应液、磁珠和产物纯化液,所述PCR反应液包含PCR缓冲液、dNTPs和DNA聚合酶,所述PCR引物包括4对相互独立的引物,第一对引物的正向引物序列为SEQ.ID NO.1,反向引物序列为SEQ.ID NO.2,第二对引物的正向引物为SEQ.ID NO.3,反向引物为SEQ.ID NO.4,第三对引物的正向引物为SEQ.ID NO.5,反向引物为SEQ.ID NO.6,第四对引物的正向引物为SEQ.ID NO.7,反向引物为SEQ.ID NO.8;所述探针包括4组相互独立的探针,第一组探针的序列为SEQ.ID NO.9,第二组探针的序列为SEQ.ID NO.10,第三组探针的序列为SEQ.ID NO.11,第四组探针的序列为SEQ.ID NO.12,所述四组探针的5’端的荧光基团均为FAM,3’端的荧光基团均为BHQ1;所述PNA试剂包含五组相互独立的PNA试剂,第一组PNA试剂中PNA序列为SEQ.ID NO.13,第二组PNA试剂中PNA序列为SEQ.ID NO.14,第三组PNA试剂中PNA序列为SEQ.ID NO.15,第四组PNA试剂中PNA序列为SEQ.ID NO.16,第五组PNA试剂中PNA序列为SEQ.ID NO.17;所述测序反应液中含有Bigdye、Bigdye缓冲液和测序引物。 |
地址 |
430223 湖北省武汉市东湖新技术开发区大学园路武大科技园宏业楼5楼 |