一种检测基质金属蛋白酶-2的生物传感器的制备方法及其应用

摘要

本发明涉及一种检测基质金属蛋白酶-2的生物传感器的制备方法及应用，首先在96孔板上修饰胶体金，利用金-硫键的结合把一端含巯基另外一端含生物素的肽连接到胶体金-96孔板上。再制备出链霉亲和素-蔗糖转化酶-胶体金探针(streptavidin-转化酶-AuNPs)。通过生物素和亲和素的特异性结合，从而得到streptavidin-转化酶-AuNPs-肽修饰的96孔板(基质金属蛋白酶-2生物传感器)。MMP-2可以把含特异性序列PLGVR的肽切割成两部分，streptavidin-转化酶-AuNPs在上清液中，吸出上清液加入果糖溶液，根据血糖仪读数，从而实现MMP-2浓度的测定。本发明的传感器具有很高的选择性和检测灵敏度。

主权项

一种检测基质金属蛋白酶‑2的生物传感器的制备方法及其应用，包括以下步骤： (1)将100μL的0.1～10μM肽溶液加到胶体金修饰的96孔板中，37℃反应12～60h，用Tris‑HCl溶液冲洗各孔，得肽修饰胶体金‑96孔板； (2)加10μL的0.1～2mg/mL链霉亲和素溶液于转化酶‑AuNPs(转化酶修饰胶体金)溶液中，置于恒温振荡器上震荡4～32h；然后以8000～14000转速下离心，将沉淀加1mL Tris‑HCl溶液分散，得链霉亲和素修饰转化酶胶体金(streptavidin‑转化酶‑AuNPs)； (3)取streptavidin‑转化酶‑AuNPs溶液加到肽修饰胶体金‑96孔板中反应，之后用Tris‑HCl溶液冲洗各孔，从而得基质金属蛋白酶‑2生物传感器； 其中：所述的胶体金修饰的96孔板按如下的方法制备而成：96孔板用无水乙醇和水依次超声处理3次，然后在37℃下干燥；将100μL胶体金溶液滴涂在处理好的96孔板中，在室温条件下使溶剂自然挥发，即得胶体金修饰96孔板(胶体金‑96孔板)； 所述的转化酶修饰胶体金按如下的方法制备而成：用NaOH溶液将胶体金溶液pH调至7.0，取0.2～2mL胶体金溶液于离心管中，然后加入500μL0.1～2mg/mL转化酶溶液，4℃反应2～12h，8000～14000转速下离心，并用PBS洗涤后分散于磷酸缓冲溶液中，即得。