主动免疫治疗慢性哮喘的呈递IL-33的VLP疫苗构建方法

摘要

本发明提供一种主动免疫治疗慢性哮喘的呈递IL-33的VLP疫苗构建方法，包括以下步骤：从小鼠提取IL-33总RNA，通过逆转录得到IL33总cDNA，用设计的特异性引物将得到的总cDNA通过PCR扩增，得到编码IL-33成熟片段基因，将该基因插入到乙肝病毒核心抗原HBcAg的78-79位氨基酸之间，得到重组质粒pHBcAg33，将该质粒转化大肠杆菌DH5α或BL21感受态细胞上，用IPTG诱导、纯化，得到呈递IL-33的病毒样颗粒疫苗。只需几次免疫注射该疫苗即可诱导强的针对自身分子的、有持续作用的中和性抗体，以调控免疫应答，达到调控哮喘疾病进程的目的。

主权项

一种主动免疫治疗慢性哮喘的呈递IL‑33的VLP疫苗构建方法，其特征在于包括以下步骤：1）、从小鼠提取IL‑33总RNA，通过逆转录得到IL‑33总cDNA，用设计的特异性引物将得到的总cDNA通过PCR扩增，得到编码IL‑33成熟片段基因，所述特异性引物设计如下：编码IL‑33成熟片段基因的上游引物(5’端)：gtggatccagcatccaaggaacttcac编码IL‑33成熟片段基因的下游引物(3’端)：gtgaattcgattttcgagagcttaaac2）、将编码截断的乙肝病毒核心抗原HBcAg克隆到pThioHisA载体，再将步骤1）得到的编码IL‑33成熟片段基因插入到乙肝病毒核心抗原HBcAg的78‑79位氨基酸之间，得到重组质粒pHBcAg33；3）、将步骤2）得到的重组质粒pHBcAg33转化大肠杆菌DH5α或BL21感受态细胞上；4）、用IPTG诱导步骤3）的转化有重组质粒pHBcAg33的大肠杆菌DH5α或BL21，高效表达IL‑33目的蛋白，并用饱和度为40%和30%的硫酸铵、体积比为39%、33%和27%的碘克沙醇，对IL‑33目的蛋白进行密度梯度离心纯化，最后用琼脂糖凝胶CL‑4B柱子纯化IL‑33目的蛋白，得到呈递IL‑33的病毒样颗粒疫苗。