用于预防人或动物慢性弓形虫病的DNA疫苗

摘要

本发明公开了用于预防人或动物慢性弓形虫病的DNA疫苗，将弓形虫缓殖子上的三个抗原基因SAG2C、SAG2D和SAG2X分别插入到真核载体pVAX1上，获得重组质粒pVAX1-SAG2C,pVAX1-SAG2D,pVAX1-SAG2X，将这三种重组质粒混合获得重组DNA疫苗。本发明采用DNA疫苗对BALB/c小鼠进行主动免疫后，通过测定免疫鼠的细胞和体液免疫指标来评价疫苗的免疫原性，通过计数小鼠弓形虫攻击实验后大脑中包囊的数量来评估疫苗的免疫保护性。本发明的DNA疫苗可有效地增强体液免疫和细胞免疫反应，有效地降低免疫小鼠在接受弓形虫PRU株（II型）攻击后大脑包囊的形成率。该疫苗可作为预防弓形虫慢性感染，控制宿主脑组织中包囊形成的有效候选疫苗。

主权项

用于预防人或动物慢性弓形虫病的DNA疫苗，其特征在于：将弓形虫缓殖子上的三个抗原基因SAG2C、SAG2D和SAG2X分别插入到真核载体pVAX1上，获得重组质粒pVAX1‑SAG2C,pVAX1‑SAG2D,pVAX1‑SAG2X，将三种重组质粒混合后获得重组DNA疫苗；是通过以下方法制备得到的：以弓形虫基因组作为模板，通过聚合酶链反应扩增获得SAG2C,SAG2D,SAG2X基因片段,并插入载体pVAX1的BamHⅠ和XbaⅠ位点间,产生pVAX1‑SAG2C，pVAX1‑SAG2D，pVAX1‑SAG2X重组质粒，提取质粒并纯化，获得重组DNA疫苗；将三种质粒等质量混合，获得混合的重组DNA疫苗；所述聚合酶链反应扩增所用的引物如下：SAG2C:P15’‑GC GGATCC ATGGTTCTGGCCTTGTCTCTTGC‑3’；P25’‑GT TCTAGA TTAAACATATTCCCTGCCACCAA‑3’；SAG2D:P15’‑GCGGATCCATGTTGAAGCTTCTGACCCAAAGA‑3’；P25’‑GT TCTAGA TTACATATTCCCTGTCACCAATGC‑3’；SAG2X:P15’‑GCGGATCC ATGTGGAGACTGCACACTCAACTG‑3’；P25’‑GT TCTAGATTAATAATTTCCCTGTCGCCGTC‑3’。