一种自体外周血淋巴细胞的培养方法

摘要

本发明涉及一种自体外周血淋巴细胞的培养方法，包括如下步骤：（1）从外周血中分离PBMC，然后，重悬于无血清培养基中，静置培养，制得初培养液；（2）向初培养液中补加无血清培养基，同时添加IL-2，静置培养，得二次培养液；（3）向二次培养液中补加无血清培养基，同时添加IL-2，静置培养，得培养液；（4）将培养液均匀分成2份，然后用无血清培养基补足体积并添加IL-2，静置培养，重复本步骤，制得自体外周血淋巴细胞；本发明通过向无血清培养基中添加多种单抗及细胞因子，提高效应细胞群活化效率和扩增效率。经检测，活化及扩增效率较现有方法明显提高，激活3天左右有大量细胞团出现。

主权项

一种培养自体外周血淋巴细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）从外周血中分离外周血单个核细胞，然后，重悬于无血清培养基中，使外周血单个核细胞的细胞浓度为（1～2）×10⁶个/mL，静置培养72～84小时，制得初培养液；（2）向步骤（1）制得的初培养液中补加无血清培养基至初培养液的2～3倍，同时添加白细胞介素2，使白细胞介素2的浓度为1×10³U/mL，静置培养84～96小时，得二次培养液；（3）向步骤（2）制得的二次培养液中补加无血清培养基至二次培养液的4～5倍，同时添加白细胞介素2，使白细胞介素2的浓度为（1～2）×10³U/mL，静置培养72～84小时，得培养液；（4）将步骤（3）制得的培养液均匀分成2份，然后用无血清培养基补足体积并添加白细胞介素2，使白细胞介素2的浓度为（1～2）×10³U/mL，静置培养72～84小时，重复本步骤2～3次，制得自体外周血淋巴细胞；所述步骤（1）中的无血清培养基，每毫升含有如下组分：干扰素γ 1000～2000U、植物凝集素P  500～1000 ng、白细胞介素1α 100～200U、细胞表面分子3单克隆抗体 50～100 ng、细胞表面分子28单克隆抗体 50～100 ng。