基于样品高效保鲜的提取水生植物DNA的方法

摘要

本发明公开了一种基于样品高效保鲜的提取水生植物DNA的方法，涉及分子生物学领域中提取水生植物DNA的方法。本方法主要是：放弃硅胶保存植物样品的方式，将水生植物新鲜叶片浸入到CTAB溶液中，加入β-巯基乙醇防止氧化，常温下保存。分别在10d、20d和30d后提取叶片的总DNA：经常温研磨、65℃水浴、氯仿和异戊醇萃取、-20℃无水乙醇沉淀后，得到絮状DNA沉淀物；75%乙醇洗涤和室温干燥后，加TE缓冲液溶解DNA，于-20℃保存备用。本发明主要针对水生植物提供了一种新型简便的样品保存方法，所获得的DNA纯度高，产量大。因此，本发明适用于水生植物基因组测序等方面研究所需高质量DNA的提取。

主权项

一种基于样品高效保鲜的提取水生植物DNA的方法，其特征在于：本方法的样品分别是海菜花、光叶眼子菜、睡莲和菱四种水生植物的新鲜叶片，每一种实验材料的提取均包括下列步骤：①称取0.3g的样品放入1.5mL的离心管中，加入800μL的CTAB溶液，并加入2.5μL的β‑巯基乙醇，将叶片完全浸没，常温下保存；②分别在10d、20d和30d后将样品和样品保存液一起转入研钵，加入0.1g的石英砂，常温研磨成细浆转入2mL离心管中，65℃水浴1h，每15min摇晃一次；③在12000rpm下常温离心5min，转移上清液到新的1.5mL离心管中，加入750μL的体积比为24∶1的氯仿：异戊醇，充分混匀后，在摇床上摇晃10min，常温12000rpm离心5min，再重复抽提1次；④经过两次抽提后的上清液转入新的离心管中，加入1/10体积的3M醋酸钠溶液，然后加入两倍体积的提前预冷到‑20℃的无水乙醇，置于‑20℃冰柜1‑3h，让DNA沉淀充分析出；⑤常温12000rpm离心5min，然后倾斜离心管，小心倒出上清液，加入1mL的75%的乙醇，漂洗1‑2次，每次30‑60min，倒干酒精；⑥常温10000rpm离心5min，加入50μL无水乙醇洗涤5min，离心倒去乙醇，将离心管置于超净工作台上3‑4h，以吹干离心管内残留的乙醇洗涤液，并干燥DNA沉淀物；⑦向离心管中加50μL的1×TE缓冲液，轻轻摇动，将离心管放入4℃冰箱内过夜使DNA充分溶解，然后加入0.5μL浓度为10μg/mL的RNA酶37℃消化1h，然后将离心管放入‑20℃冰柜中保存。