一种青藏高原藏羊mtDNA Cytb全序列合成方法

摘要

本发明公开了一种青藏高原藏羊mtDNACytb全序列合成方法，包括以下步骤:（1）绵羊线粒体Cytb全序列的收集及与近缘线粒体Cytb序列的比对；（2）引物设计与PCR扩增；（3）PCR产物测序与序列组装。本发明获得了青藏高原15个藏羊地方品种642个个体的mtDNA Cytb全序列。本发明的检测方法具有速度快、成本低、易掌握等优点，所获得的mtDNA Cytb全序列可应用于青藏高原藏羊遗传资源多样性评估、遗传变异分析、系统进化分析、母系起源和系统发育研究及种质资源鉴定与保护等领域。

主权项

一种青藏高原藏羊mtDNA  Cytb全序列合成方法，其特征是，包括以下步骤：（1）绵羊mtDNA  Cytb 全序列的收集与分析：收集绵羊mtDNA  Cytb全序列，并与近缘种的mtDNA  Cytb全序列进行比对，分析mtDNA  Cytb全序列在近缘种的mtDNA全基因组序列上的相对位置；（2）引物设计与PCR扩增：根据mtDNA  Cytb基因在近缘种全基因组序列保守区域设计上、下游PCR引物，采用PCR方法扩增相邻的两个已知序列的未知序列，其中，PCR引物和测序引物1对，其引物序列为：Forward  primer：5’‑TGAAGAAAACCCCACAAAACCT ‑3’Reverse  primer：5’‑TTGGGTGTTGATAGTGGGGC‑3’；（3） PCR产物测序与序列组装：通过PCR产物测序反应体系对PCR产物进行测序、序列分析，将mtDNA  Cytb序列进行组装，获得mtDNA  Cytb全序列。