一种使用磁珠从血清或血浆样品中分离游离核酸的方法

摘要

本发明涉及一种使用磁珠从血清或血浆样品中分离游离核酸的方法，属于核酸纯化领域。首先向在无核酸酶离心管中加入血清/血浆样本、裂解缓冲液、蛋白酶K和磁珠悬浮液，充分混匀后进行裂解，并使核酸吸附到磁珠表面，在外加磁场的作用下进行纯化，经过漂洗步骤去除蛋白、多糖和盐等杂质，最后加入无核酸酶的水洗脱，得到游离核酸溶液。本发明方法具有简单快速、稳定高效和价格便宜的特点，所纯化游离核酸完整、纯度高，可直接用于后续实验。

主权项

一种使用磁珠从血清或血浆样品中分离游离核酸的方法，其特征在于该方法包括以下各步骤：（1）在盛有1.5毫升无核酸酶的离心管中加入200微升血清/血浆样本和300微升裂解缓冲液，得到混合液；（2）向离心管的混合液中加入20微升蛋白酶K和15微升充分摇匀的磁珠悬浮液，充分混匀，室温下用移液器吹吸或上下颠倒混匀10分钟；（3）将上述离心管置于磁力架上，磁吸附1分钟，使磁珠完全吸附于离心管壁，吸弃上清；（4）将步骤（3）的离心管从磁力架上取下，加入500‑600微升第一漂洗缓冲液，用移液器吹吸或涡旋振荡混匀，再将离心管置于磁力架上，磁吸附1分钟，吸弃上清；（5）将步骤（4）的离心管从磁力架上取下，加入500‑600微升第二漂洗缓冲液，用移液器吹吸或涡旋振荡混匀，再将离心管置于磁力架上，磁吸附1分钟，吸弃上清；（6）将步骤（5）的离心管置于磁力架上，缓慢加入500‑600微升第三漂洗缓冲液，磁吸附1分钟，吸弃上清；（7）将步骤（6）中的离心管从磁力架上取下，加入50‑100微升洗脱缓冲液，用移液器吹吸混匀，56℃孵育5分钟，晃动离心管，使核酸充分洗脱；（8）将步骤（7）的离心管置于磁力架上，磁吸附1分钟，使磁珠吸附于离心管壁，将洗脱液转移至干净的离心管中，洗脱液即为分离的游离核酸。