发明名称 |
一种基于CSF-FMD二联基因工程疫苗的制备方法 |
摘要 |
本发明涉及一种基于CSF-FMD二联基因工程疫苗的制备方法,公开了基于猪瘟病毒和猪O型口蹄疫病毒二联核酸疫苗的研究及应用。基于猪瘟病毒和猪O型口蹄疫病毒二联核酸疫苗主要原料为:pcDNA3.1-CSFV-E2-FMDV-O-VP1真核质粒。本发明本发明针对CSFVE2基因和FMDV-OVP1进行核酸疫苗研究,可刺激动物机体产生相应高水平的抗体,体现出很强的特异性。针对CSFV和FMDV-O引发猪的感染和传播,通过E2基因和VP1基因对两种病毒起到防控效果,可达到安全和有效的效果。 |
申请公布号 |
CN103933581A |
申请公布日期 |
2014.07.23 |
申请号 |
CN201410182816.0 |
申请日期 |
2014.05.04 |
申请人 |
贵州大学 |
发明人 |
王开功;尹鑫;周碧君;文明;程振涛;王慧 |
分类号 |
A61K48/00(2006.01)I;A61K39/395(2006.01)I;A61P31/14(2006.01)I;A61K39/187(2006.01)N;A61K39/135(2006.01)N |
主分类号 |
A61K48/00(2006.01)I |
代理机构 |
贵阳中新专利商标事务所 52100 |
代理人 |
吴无惧 |
主权项 |
一种基于CSF‑FMD二联基因工程疫苗的制备方法,其特征在于:包含以下步骤:(1)猪瘟病毒病料CSFV‑E2的RT‑PCR扩增;猪O型口蹄疫病毒病料FMDV‑O VP1的RT‑PCR扩增;(2)回收RT‑PCR产物,与pMD19‑T载体连接;将连接产物转化入大肠埃希氏菌DH5α感受态细胞培养,挑取上述转化平皿中的白色菌落,接种到含有氨苄青霉素的2×YT液体培养基中,振荡培养至混浊,提取质粒并进行酶切鉴定,筛选出阳性并进行测序;(3)将所构建重组质粒pMD19‑CSFV‑E2与pcDNA3.1(+)载体分别进行BamH I和EcoR I双酶切,回收纯化目的片段,将二者用T4 DNA连接酶连接,连接产物转化至DH5α感受态细胞,获得阳性重组质粒pcDNA3.1‑CSFV‑E2,利用试剂盒提取质粒,进行BamH I和EcoR I双酶切及PCR鉴定,并送测序验证;(4)将所构建重组质粒pMD19‑FMDV‑O‑VP1与pcDNA3.1‑CSFV‑E2分别进行BamH I和Hind<img file="2014101828160100001dest_path_image002.GIF" wi="17" he="21" />双酶切,回收纯化目的片段,将二者用T4 DNA连接酶连接,连接产物转化至DH5α感受态细胞,获得阳性重组质粒pcDNA3.1‑CSFV‑E2‑FMDV‑O‑VP1,利用试剂盒提取质粒,进行BamH I和Hind<img file="385403dest_path_image002.GIF" wi="17" he="21" />双酶切及PCR鉴定,并送公司测序验证。 |
地址 |
550025 贵州省贵阳市贵州大学花溪北校区科技处 |