水稻或水稻加工品中Bt基因快速检测方法

摘要

本发明属于农产品检验领域，公开了水稻或水稻加工品中Bt基因快速检测方法。该检测方法以步骤（1）提取的水稻或水稻加工品基因组DNA为模板，以上游外引物F3:SEQ ID NO.1、下游外引物B3：SEQ ID NO.2、上游内引物FIP：SEQ ID NO.3、下游内引物BIP：SEQ ID NO.4进行LAMP扩增；根据反应结果判断水稻或水稻加工品中是否含有Bt基因。本发明通过一系列的LAMP反应体系、反应条件优化实验及引物特异性实验，成功地建立了米制品中Bt基因的LAMP快速检测方法，检出限达到0.005%，该法具有操作简单、不需要特殊仪器、结果易于观察的优点，适合于基层推广。

主权项

水稻或水稻加工品中Bt基因快速检测方法,其特征在于包含如下步骤：（1）提取水稻或水稻加工品基因组DNA；（2）以步骤（1）提取的基因组DNA为模板，以上游外引物F3:SEQ ID NO.1、下游外引物B3：SEQ ID NO.2、上游内引物FIP ：SEQ ID NO.3、下游内引物BIP：SEQ ID NO.4进行 LAMP扩增；所述的LAMP反应体系为： 10×Thermopol 反应缓冲液 2.50μL，25 mM MgCl₂ 3.00μL，20 mM dNTPs 3.50μL，8 U/μL Bst DNA 聚合酶0.80μL，20 μM上游内引物 FIP 1.60μL，20 μM下游内引物引物BIP 1.60μL，10 μM上游外引物F3 0.25μL，10 μM下游外引物B3 0.25μL，5 M 甜菜碱 1.00μL，100 ng/μL DNA 模板 1.00μL，无核酸酶纯水 9.50μL，共计25μL；所述的LAMP反应程序为：61℃恒温反应60min，80℃保温10min 终止反应；（3）扩增产物用两种方法进行检测：A. 2%琼脂糖凝胶电泳，电泳完毕，凝胶成像系统拍照成像，如果电泳结果呈现LAMP典型的梯状条带，则说明水稻或水稻加工品中含有Bt基因；B.取15μL反应产物，加入2μL SYBR GreenⅠ染料，片刻后对结果直接进行可视化观察，若反应液显示绿色荧光，则样品中含有Bt基因，若显示浅橙色则为阴性结果。