K14-VEGF转基因小鼠模型及其构建方法与应用

摘要

本发明属于动物模型技术领域。本发明提供了一种K14-VEGF转基因小鼠模型及其构建方法，是利用原核显微注射技术将包含人类角蛋白14启动子和鼠编码基因VEGF-A164插入到FVB鼠基因组内，由人类角蛋白14启动子控制的小鼠VEGF-A164表达，使转基因鼠表皮基底层过度表达VEGF-A164。本发明构建的K14-VEGF转基因动物模型可自发的产生银屑病表型特征。本发明的K14-VEGF转基因小鼠模型进一步地筛选、纯化与建系。本发明的动物模型可应用于研究银屑病发病机理和筛选预防和治疗银屑病的药物。

主权项

一种K14‑VEGF转基因小鼠模型的构建方法，其特征在于，该方法是利用原核显微注射技术将包含人类角蛋白14启动子和鼠编码基因VEGF‑A164插入到FVB鼠基因组内，由人类角蛋白14启动子控制的小鼠VEGF‑A164表达，使转基因鼠表皮基底层过度表达VEGF‑A164，该方法包括以下步骤： A、PCR扩增如SEQ ID NO:1所示的attB1‑mVEGF164‑attB2和如SEQ IDNO:2所示的attB2r‑hGH‑attB3，BP反应构建中间载体pDown‑mVEGF164和pTail‑hGH； B、利用Gateway克隆技术将pUp‑K14、pDown‑mVEGF164、pTail‑hGH与常规质粒pRP.Des3d进行LR反应，构建pRP.EX3d‑K14>mVEGF164>hGH，全序列如SEQ ID NO:7所示； C、阳性克隆测序确认后，线性化后回收相应片段，对受精卵雄原核进行显微注射，制备转基因小鼠并逐步进行繁殖纯化。