一种表达羰基还原酶的重组工程菌及其应用

摘要

本发明公开了一种表达羰基还原酶的重组工程菌及其应用，该工程菌包括宿主细胞和转入宿主细胞的重组载体，所述重组载体由原始载体及接入原始载体的目的基因构成，所述宿主细胞为大肠杆菌(Escherichiacoli)Rosetta(DE3)，所述的目的基因为羰基还原酶基因，碱基序列如SEQ IDNO.1所示。本发明重组工程菌羰基还原酶表达水平较高，利用诱导培养的菌体细胞将氮，氮-二甲基-3-氧基-3-(2-噻吩)-l-丙胺盐酸盐转化为(S)-氮，氮-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-l-丙胺；或将4-氯乙酰乙酸乙酯转化为(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯，两种产物的光学纯度及转化率均较高。

主权项

重组工程菌在生产手性药物中间体中的应用，包括以下步骤：(1)将所述重组工程菌接入培养基，诱导培养后收集菌体细胞；(2)将菌体细胞悬浮于pH6～7的缓冲液中，加入原料和共底物，反应完成后，分离纯化得到手性药物中间体；所述原料为氮,氮‑二甲基‑3‑氧代‑3‑(2‑噻吩)‑l‑丙胺或其盐酸盐、4‑氯乙酰乙酸乙酯；所述手性药物中间体为(S)‑氮,氮‑二甲基‑3‑羟基‑3‑(2‑噻吩)‑l‑丙胺或(S)‑4‑氯‑3‑羟基丁酸乙酯；所述重组工程菌，包括宿主细胞和转入宿主细胞的重组载体，所述重组载体由原始载体及插入原始载体的目的基因构成，所述宿主细胞为大肠杆菌(E.coli)Rosetta(DE3)，所述目的基因为羰基还原酶基因，碱基序列如SEQ ID NO.1所示；所述原始载体为pET‑28a(+)；所述反应的温度为30～35℃；所述反应的时间为24～48h；所述共底物为葡萄糖；所述原料的浓度为2～5g/L，所述共底物的浓度为5～12g/L，所述菌体细胞的浓度为2～10g/L。