蛹虫草腺苷的提取方法

摘要

本发明涉及一种蛹虫草腺苷的提取方法，属于生物制品加工技术领域。本发明主要是将蛹虫草子实体经低温超微粉碎后先进行反复冻融3~7次，以破坏细胞内部成分，并进一步损坏蛹虫草细胞壁；再模拟人体胃肠道酸碱环境，应用半仿生提取工艺对蛹虫草中的腺苷进行3次连续微波加热提取，最后用高效液相色谱仪测定提取液中腺苷的含量。本发明模拟人体胃肠道酸碱环境进行蛹虫草腺苷的提取，酸碱环境不仅有利于腺苷形成盐，促进其溶出，而且，所获得的腺苷提取率高，易于后续的分离纯化工艺的进行，也易于加工成各种类型的药剂；在生产加工成口服液或其他类型的剂型之后，可确保蛹虫草有效成分的直接吸收，减轻肠胃负担。

主权项

一种蛹虫草腺苷的提取方法, 其特征在于，所述方法为超微粉碎、反复冻融、微波提取和半仿生提取多种工艺的组合，具体包括以下步骤： (1) 蛹虫草的培养：以蚕蛹为主要原料，大米为辅料对蛹虫草进行培养，具体操作步骤包括：a. 蛹虫草培养基的配制：培养基配方为干蚕蛹粉130~140 g/L；大米粉60~65 g/L；磷酸二氢钾1.2 ~1.5g/L；磷酸二氢钠0.8~1.2 g/L；加水先溶解KH₂PO₄、NaH₂PO₄、充分混匀后再加入上述干蚕蛹粉、大米粉混合均匀，匀浆，分装，每瓶装50 ml，盖好盖子，于121℃，1.1Mpa的条件下湿热灭菌30~45 min，冷却后备用；b.接种：于步骤a所得蛹虫草培养基中接种蛹虫草菌种，其密度为3～5个菌球/mL，所述蛹虫草培养基与所述蛹虫草菌种的体积比为50:1，接种后于22℃、湿度75～85%的条件下避光培养3～5天，使虫草菌丝迅速长满培养基表面，然后进行以下光照培养； 第一阶段生长培养：在生长期第5～20天内光照培养，白天12小时自然光光照，温度20~22℃、湿度80～85%，光照强度控制在100～150Lx；晚上12小时闭光，温度18~20℃、湿度75～85%，每天通风2次，早晚各一次，每次通风20～30分钟；第二阶段生长培养：在生长期第20～35天内，白天12小时自然光加日光灯光照，温度20~22℃、湿度75%～85%，光照强度控制在1000~1200 Lx；晚上12小时闭光，温度18~20℃、湿度75～85%，每天通风2次，早晚各一次，每次通风时间为20～30分钟；c.收获及再培养：旋开培养瓶盖，镊子用75%酒精消毒后，将步骤b所得培养基上面的子实体取出，将取出的子实体置于干净的不锈钢盘中，挑选色泽均匀、粗壮、完整的子实体，去除残存的培养基后置于新的不锈钢盘中称重备用；培养瓶中剩余部分按第20~35天的培养条件及方法继续培养后用于再次收获；d.烘干：将步骤c所得蛹虫草子实体置于垫有纱布的不锈钢盘中，均匀铺开，30~37℃热风循环烘干待用，水分含量最终控制在10%以下；(2) 低温超微粉碎：通过低温超微粉碎技术破除蛹虫草子实体坚硬的细胞壁；(3)反复冻融提取：反复冻融超微粉碎粉末3~7次，以使蛹虫草细胞壁破除更充分，同时损坏胞质内的细胞器结构，以利于蛹虫草中腺苷的溶出；(4)半仿生微波加热提取：分别在pH值为4.5~5.5的酸性水，pH值为6.5~7.5的中性磷酸钠缓冲液和pH值为8.0~8.5的碱性水中对蛹虫草中的腺苷进行3次连续提取。