半固体培养基及其制备方法和杂交瘤细胞筛选方法

摘要

本发明涉及一种半固体培养基，其包括甲基纤维素溶液、2×1640培养基、L-谷氨酰胺溶液、β-巯基乙醇溶液、胎牛血清、青霉素与链霉素混合溶液、HAT溶液及抗原包被的纳米金颗粒溶液。该半固体培养基可直接用于杂交瘤细胞的培养和筛选，不仅能减少培养过程总亚克隆的次数，在很大程度上降低劳动强度，而且可以使单个细胞株之间生长空间相对独立，减少克隆株与克隆株之间的接触抑制备用，同时通过引入包被有抗原的纳米金颗粒，使得能一步筛选到分泌目的抗体的单抗隆细胞株，进一步节省了单克隆筛选的时间。此外，本发明还涉及一种半固体培养基的制备方法以及使用该半固体培养基的杂交瘤细胞筛选方法。

主权项

一种半固体培养基，其特征在于，包括如下体积份数的各组分：浓度为0.4g/ml的甲基纤维素溶液                         10；pH 7.0~7.4的2×1640培养基                             18；浓度为1mol/l的L‑谷氨酰胺溶液                          0.16；浓度为1mmol/l的β‑巯基乙醇溶液                        0.5；胎牛血清                                              10；10000单位/ml的青霉素与10000μg/ml链霉素混合溶液       0.4；50×HAT溶液                                           0.8；及抗原包被的纳米金颗粒溶液                              0.1；其中，每毫升所述抗原包被的纳米金颗粒溶液是通过将1μg的抗原‑PEG₆‑CONHNH₂、1ml的纳米金颗粒溶液及1mmol的mPEG‑SH分别室温震荡孵育后20min后，2500×g 4℃离心30min，用1×PBS缓冲液稀释至990μl，再加入10μl的质量分数为20%的PEG溶液制备得到；其中，所述纳米金颗粒溶液是向沸腾的50ml 0.254mM的氯金酸溶液逐滴加入0.94ml 38.8mM的柠檬酸三钠溶液继续煮沸5min后冷却而成。