一种抗除草剂莎稗磷的特异性抗体

摘要

除草剂莎稗磷的半抗原、人工抗原和抗体的制备涉及具有除草剂莎稗磷基本结构的半抗原、人工抗原和抗体的制备。本发明以简便的方法制备了特异性良好的除草剂莎稗磷的抗体。该抗体是以N-氯乙酰基-N-异丙基-4-氯苯胺与巯基乙酸合成半抗原，然后分别与牛血清白蛋白(BSA)和辣根过氧化酶(HRP)连接合成人工抗原和酶标抗原。人工抗原再经动物免疫，取血，分出抗血清，纯化制得抗体。该抗体稳定，具有良好的特异性和灵敏度，且合成方法简单，可用于环境、农产品和食品中除草剂莎稗磷残留的快速免疫检测，具有良好的应用前景。

主权项

1.一种除草剂莎稗磷的人工抗原的制备方法，其特征在于，使用分子式为的半抗原与牛血清白蛋白连接合成人工抗原，具体制备由下述步骤组成：(1)N-氯乙酰基-N-异丙基-4-氯苯胺的合成称取5.859g N-异丙基对氯苯胺、28ml无水甲苯、3.57g三乙胺置于圆底烧瓶中，在室温搅拌下，利用恒压滴液漏斗向其中逐滴滴加3.92g氯乙酰氯，控制滴加的速度使温度保持在65℃以下，滴加完毕后，保持温度在110℃回流5-6h，冷却，过滤，用苯洗涤生成的三乙胺盐酸盐，滤液水洗至中性，无水硫酸钠干燥，过滤，得到一深色溶液，将深色溶液过硅胶柱纯化，收集目标组分并旋蒸掉其中的大部分有机溶剂，室温冷却，析出的白色结晶即为N-氯乙酰基-N-异丙基-4-氯苯胺；(2)半抗原的合成称取2.25g氢氧化钠溶解于18ml水中，向其中加入132.65mg巯基乙酸，搅拌15min后，向其中投入354.24mg的CCPA，回流2h，冷却，用浓盐酸酸化至pH＝1.过滤，水洗，得到白色固体；(3)称取4.568mg半抗原于一棕色小瓶中，加入350μl DMSO，超声2h，半抗原溶解。再分别称取8.711mgN-羟基琥珀酰亚胺、6.242mgN,N-二环已基碳二亚胺加入上述半抗原的DMSO溶液中，搅拌反应24h，离心出去沉淀，得到活化酯液；(4)人工抗原的合成：将上述活化酯液逐滴缓慢地加入到由20mg牛血清白蛋白溶解于4mlpH＝7.4的PBS缓冲液中所配置的溶液中，4℃反应过夜，反应产物于4℃、pH7.4的磷酸盐缓冲液中透析三天，然后精确量取蛋白质偶联物溶液的体积，测定浓度，分装，-20℃保存。