基于液相色谱-质谱联用的大规模血浆鞘脂轮廓分析方法

摘要

本发明公开了一种基于液相色谱-质谱联用的大规模血浆鞘脂轮廓分析方法，其特征在于：采用甲基叔丁基醚/甲醇/水（MTBE/MeOH/H₂O）双相提取，并结合温和碱性水解，提取血浆中鞘脂。随后用超高效液相色谱-电喷雾离子化-质谱联用在15min内实现快速半定量分析。本发明中的MTBE/MeOH/H₂O提取体系简单，快速，易于操作，提取液中蛋白干扰少，重复性好，同时通过水解除去脂质组中高丰度磷脂和甘油酯的干扰，降低离子抑制，达到高灵敏度检测低丰度鞘脂的目的。后续的超高效液相色谱（UHPLC）的高分辨分离能力和MRM的特异性，可以实现对异构体的有效区分，避免定量时引入复杂的同位素校正，使更快速、准确。

主权项

基于液相色谱‑质谱联用的大规模血浆鞘脂轮廓分析方法，其特征在于：第一步，将低温保存的血浆冰浴下解冻，定量移取并加入内标溶液，涡旋混匀；第二步，冰浴下加入甲醇和甲醇钠‑甲醇（MeONa‑MeOH）溶液，涡旋；加入MTBE，涡旋；第三步，置于摇床上震荡；第四步，取出后冷却至室温，加入乙酸水溶液和纯水，涡旋；第五步，高速离心后定量取出上清，冷冻干燥；第六步，分析前用复溶液复溶，涡旋，用于超高效反相液相色谱‑质谱分析。