铁皮石斛茎段组培快繁方法

摘要

本发明公开了一种铁皮石斛茎段组培快繁方法，属于生物技术领域。该方法以为1年以上生长期的铁皮石斛离根部三节以上的茎段为外植体材料进行组培快繁，包括以下步骤：茎段外植体的准备、消毒、诱导培养、继代培养、壮苗培养、生根培养、光培炼苗。本发明具有取材容易、材料量大、不受季节限制优点，能较好的保持母本的生物学性状，培养技术简单易行，污染率低，繁殖速度快，对濒危紧缺药用植物资源再生和持续利用具有重要意义。

主权项

一种铁皮石斛茎段组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）茎段外植体的准备：取成年态铁皮石斛茎段，除去叶片，用流水冲洗干净；所述成年态铁皮石斛茎段为1年以上生长期的铁皮石斛离根部三节以上的茎段；（2）茎段外植体的消毒：将清洗干净的茎段外植体取出，置烧杯中，用0.1%的升汞溶液浸泡5分钟，用无菌水冲洗4～5次，置超净工作台上，切成长度为1～2cm、带2～3个节的小茎段，再用0.1%的升汞溶液浸泡3分钟，用无菌水冲洗4～5次，备用；（3）诱导培养：将消毒好的小茎段接种于无菌诱导培养基中，该培养基配方为：MS+6‑BA0.8～1.2mg/L+NAA0.8～1.2mg/L，培养条件：温度24～26℃、日光灯照射24小时/天、光照强度800～1200lx，培养40天后，茎段在节间处长出新芽；（4）第一次增殖培养：将新芽转接到第一次增殖培养基中，第一次增殖培养基的配方为：MS+6‑BA4.8～5.2mg/L+NAA0.8～1.2mg/L，温度24～26℃、日光灯照射24小时/天、光照强度800～1200lx，培养30天后，在切口处长出第一代丛生芽；（5）第二次增殖培养：将第一代丛生芽切割后转接到第二次增殖培养基中，第二次增殖培养基的配方为：MS+6‑BA3.8～4.2mg/L+NAA0.8～1.2mg/L，温度24～26℃、日光灯照射24小时/天、光照强度800～1200lx，培养30～40天，在切口处长出第二代丛生芽；（6）第三次增殖培养：将第二代丛生芽切割后转接到第三次增殖培养基中，第三次增殖培养基的配方为：MS+6‑BA1.5～2.5mg/L+NAA0.8～1.2mg/L，温度24～26℃、日光灯照射24小时/天、光照强度800～1200lx，培养30～40天，在切口处长出1cm高的第三代丛生芽，并开始有不定根生长；（7）壮苗培养：将第三代丛生芽切割后转接于壮苗培养基中，该培养基配方为：MS+NAA1.0～1.5mg/L，培养条件：温度24～26℃、日光灯照射16小时/天、光照强度2000～2400lx，培养30～45天，形成2～3cm高的不定芽；（8）生根培养：将不定芽接种于生根培养基中，该培养基配方为：MS+NAA0.8～1.2mg/L，培养条件：温度24～26℃、日光灯照射16小时/天、光照强度2000～2400lx，培养60～75天，每株苗形成2～3条根，根长2～4cm，直径约1mm；（9）光培炼苗：将已生根的苗连同培养瓶转入大棚，在温度为25～30℃下，放置7天，去掉瓶塞，炼苗5～7天，即可将种苗取出移栽。