一种靶向STAT3的慢病毒干扰载体的构建及鉴定

摘要

本发明涉及针对STAT3基因的不同部位，构建靶向STAT3的shRNA慢病毒干扰载体，鉴定并筛选出最佳抑制效率的干扰载体。针对STAT3基因的不同部位设计4对短发卡RNA(shRNA)的寡核苷酸片段，克隆到慢病毒干扰载体pLenti中，构建靶向载体PLKO.1-STAT3-shRNA-a1、a2、a3、a4。利用脂质体将其与包装外壳蛋白质粒(pVSV-g)和包膜质粒(Pax-2)共转染293T细胞，荧光显微镜观察293T细胞绿色荧光蛋白(GFP)表达。获取病毒悬液并测定其滴度，以定量病毒感染靶细胞后，Western blot法进行检测筛选。4个干扰载体经酶切和测序确定基因插入正确，筛选结果证实其明显降低细胞内STAT3蛋白的表达。本发明为进一步研究JAK/STAT信号通路参与调控血管再狭窄过程中细胞增殖迁移的分子机制及为血管桥再狭窄的分子靶向治疗奠定了基础。

主权项

一种重组慢病毒质粒载体，其特征是该载体含有大鼠的STAT3的基因干扰片段。