发明名称 |
基因组随机扩增序列SNP多态性及甲基化多态性的方法 |
摘要 |
本发明涉及一种基因组随机扩增序列SNP多态性及甲基化多态性的方法,是选取目标物种提取DNA后选择酶切位点进行酶切;设计连接接头、标签,合成带有选择标签的EcoR I酶切位点接头;分别用EcoR I与Msp I、EcoR I与HpaⅡ对样本进行酶切,再将带有选择标签的EcoR I酶切位点接头用T4连接酶与分别对应酶切好的基因组进行连接,同时分别连接上酶切位点接头;进行PCR扩增,选择高通量的Hiseq2000双端对PCR扩增产物进行混合测序。本发明利用现代高通量测序技术,通过对基因组进行降维,提高组装准确性,降低成本,提高分子育种效率,为现在分子育种提供一个高效、便利的SNP发现与甲基化多态性为一体的方法。 |
申请公布号 |
CN103882147A |
申请公布日期 |
2014.06.25 |
申请号 |
CN201410154134.9 |
申请日期 |
2014.04.17 |
申请人 |
中国热带农业科学院热带生物技术研究所 |
发明人 |
夏志强;邹枚伶;王文泉 |
分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
主分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
代理机构 |
海口翔翔专利事务有限公司 46001 |
代理人 |
莫臻 |
主权项 |
一种基因组随机扩增序列SNP多态性及甲基化多态性的方法,其特征在于,其步骤如下:1)、酶切位点选择选取目标物种,提取DNA,进行酶切,其中双酶切的6碱基酶切位点和4碱基酶切位点进行组合EcoRI和Msp I/HpaⅡ;2)、接头设计设计两套不同的连接接头:EcoR I酶切位点与MspⅠ酶切位点接头,EcoR I酶切位点与HpaⅡ酶切位点接头,其中,在EcoR I酶切位点的接头中间部分设计5个碱基的可变标签以区分不同的样品;EcoR I酶切位点接头序列:5′‑TAGCTCGTAGACACCGTCAGxxxxxG‑3′ 和5′‑AATTCxxxxxCTGACGGTGTCTACGAGCTA‑3′;这里“xxxxx”为5个Barcode标签碱基;HpaⅡ酶切位点接头序列:5’‑CGGTGAGATGAGGCATGAC‑3’和5’‑GTCATGCCTCATCTCAC‑3’;MspⅠ酶切位点接头序列:5’‑CGGACTAATGAGGCATGAC‑3’和5’‑GTCATGCCTCATTAGTC‑3’;3)、Barcode标签设计设计96个标签,分别合成96个带有选择标签的EcoR I酶切位点接头;96个标签如下:1、TGGCT;2、GAGAT;3、GCCTT;4、CAGCT;5、TGCTT;6、ATAGG;7、TGTTG;8、CTTAG;9、GTCGT;10、AATGA;11、AACTT;12、CTCGG;13、TGTGT;14、GTAAG;15、ACGTT;16、AATCT;17、CGCGT;18、TCACA;19、CCGCA;20、CATGG;21、TAGTT;22、CTCTA;23、TCCGT;24、TATGT;25、TCGTA;26、GAATT;27、ACCGA;28、ACACG;29、GCTCA;30、CTTGA;31、TAGAG;32、ATTAT;33、GCGGA;34、CAATA;35、TCTGA;36、ACTAA;37、GGCAT;38、CTACA;39、TACCT;40、TCGCG;41、CTCAT;42、TTCCA;43、ATATT;44、GCGAG;45、TTCTG;46、GAGTG;47、CATAT;48、GTTAA;49、TAACA;50、TCTCT;51、ACCTG;52、CGGTG;53、GATTA;54、GCACT;55、ACTGG;56、ATTCA;57、TGAGA;58、GGCCA;59、GTGTT;60、CCATG;61、CCTTA;62、TTGAA;63、TGCAA;64、TCCAG;65、AAGCG;66、CGCCG;67、GGATA;68、TGTAG;69、TCCAA;70、TCATT;71、TATCA;72、GGAGG;73、CACCA;74、TGCGG;75、ATGCT;76、GTTCT;77、ATCAA;78、CCGAT;79、AATTG;80、AAGCA;81、CTTAT;82、GTAGA;83、CCTCG;84、GAACT;85、TTACT;86、ATCCG;87、CGTCA;88、CAGAA;89、ACAGT;90、GGTTG;91、GCTAT;92、ATGTG;93、GTGCG;94、TGAAT;95、CAAGT;96、GGTGT;4)、连接筛选96个目标物种样本,分别用EcoR I与Msp I、EcoR I与HpaⅡ对96个样本进行酶切,分成两组,每组96个样;再将96个带有选择标签的EcoR I酶切位点接头用T4连接酶与分别对应酶切好的基因组进行连接,同时分别连接上MspⅠ酶切位点接头、HpaⅡ酶切位点接头;设计引物:EcoR I:5’‑TAGCTCGTAGACACCGTCAG‑3’;Msp I:5’‑GTCATGCCTCATTAGTCCGG‑3’;HpaⅡ:5’‑GTCATGCCTCATCTCACCGG‑3’再进行PCR扩增,每一个样品对应一个碱基标签号;5)、测序选择高通量的Hiseq2000双端对两组96个PCR扩增产物进行混合测序。 |
地址 |
570000 海南省海口市龙华区城西学院路4号 |