甜菜胚珠切割透明制片方法

摘要

甜菜胚珠切割透明制片方法，涉及一种胚珠切割透明制片方法。本发明是要解决现有观察甜菜胚囊的方法处理量大，费时、费力的问题。方法：一、取样及固定；二、整体染色；三、用解离液解离，再用蒸馏水冲洗；四、把解离后的甜菜花蕾放置在培养皿内，用解剖针在解剖镜下将胚珠从子房中分离出来，在距胚珠珠孔端1/3处对胚珠进行切割；五、将分离切割后留下的株孔端1/3部分放在载玻片上，滴透明剂，再滴硼砂洋红染色液，静置；六、制片。该方法快速省时，极大的减少了工作量，实验效果良好，成本低，易于操作。本发明方法用于观察甜菜胚囊。

主权项

甜菜胚珠切割透明制片方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：一、取样及固定：取甜菜的花蕾于FPA固定液中固定24h，然后将甜菜花蕾浸泡在体积浓度为70%的乙醇溶液中，贮存在4℃冰箱中备用，其中每100mL FPA固定液由5mL福尔马林、5mL丙酸和90mL体积浓度为50%的乙醇溶液组成；二、整体染色：将步骤一固定后的甜菜花蕾浸泡在硼砂洋红染色液中进行整体染色，染色时间为4～5d，染色后用溶液A浸泡5～8分钟，再用体积浓度为70%的乙醇溶液冲洗至呈现透明的红色；三、然后用解离液解离，解离时间为5～10min，再用蒸馏水冲洗2～3次；四、把步骤三解离后的甜菜花蕾放置在培养皿内，用解剖针在解剖镜下将胚珠从子房中分离出来，然后在距胚珠珠孔端1/3处对胚珠进行切割，保留珠孔端的1/3部分；五、将分离切割后留下的株孔端1/3部分放在载玻片上，滴一滴透明剂，然后在透明剂中滴一滴硼砂洋红染色液，静置2～3min；六、制片：胚珠透明染色后盖上盖玻片，用记号笔在盖玻片上做一标记确认株孔端的方位，压片排除盖玻片内的气泡，在已做过标记的珠孔方向敲击，即完成制片。