组织干细胞提取物及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种组织干细胞提取物及其制备方法和应用。本发明的方法包括如下步骤：(1)将含干细胞的小鼠组织匀浆液离心，收集上清；(2)将上清进行ConA琼脂糖凝胶柱层析，收集洗脱液；(3)将洗脱液进行Hitrap Q阴离子交换柱层析，收集洗脱液；(4)将洗脱液进行浓缩，得到组织干细胞提取物。本发明的提取物免疫数周后，可引发机体的特异免疫反应，清除体内肿瘤干细胞和/或肿瘤休眠细胞，以及癌变的细胞，从而达到预防和治疗癌症的目的。本发明的提取物可作为肿瘤预防性疫苗，用于自体或异体肿瘤防治，降低健康人群中癌症的发生率，也可作为肿瘤治疗性疫苗，患者术后即时施治能有效防转移防复发，或作为化学疗法的辅助治疗。

主权项

组织干细胞提取物在制备预防和/或治疗癌症的药物中的应用；所述癌症为黑色素瘤或乳腺癌；所述组织干细胞提取物的制备方法，包括如下步骤：（1）将离体的含有干细胞的小鼠组织的匀浆液离心，收集上清液；（2）将步骤（1）得到的上清液进行ConA琼脂糖凝胶柱层析，收集第0.5‑3柱体积的洗脱液；所述进行ConA琼脂糖凝胶柱层析时用溶液C进行洗脱；所述溶液C由溶质和溶剂组成，所述溶剂为20mM pH7.4 Tris‑HCl溶液，所述溶质及其在所述溶液C中的浓度如下：10g/100mL α‑D‑吡喃葡萄糖、500mM NaCl、1mM PMSF；（3）将步骤（2）得到的洗脱液进行Hitrap Q阴离子交换柱层析，用300‑800mM NaCl的PBS溶液进行线性梯度洗脱，共洗脱20个柱体积，收集用400‑450mM NaCl的PBS溶液洗脱得到的洗脱液；（4）将步骤（3）得到的洗脱液进行截留分子量为50KD的浓缩，得到组织干细胞提取物；组织干细胞提取物的制备方法中，所述离体的含有组织干细胞的小鼠组织为离体的小鼠胎盘、小鼠脐带血或小鼠骨髓；所述组织干细胞提取物中含有热休克蛋白gp96。