一种人氧化低密度脂蛋白的酶联免疫检测试剂盒及使用方法、用途

摘要

本发明提供了一种人氧化低密度脂蛋白的酶联免疫检测试剂盒，它包含如下成分：（1）包被有抗人氧化低密度脂蛋白抗体的酶标板；（2）人氧化低密度脂蛋白系列标准溶液；（3）酶标记抗体；（4）稀释液；（5）洗涤液；（6）底物液；（7）终止液。本发明还提供了该试剂盒的使用方法和用途。本发明与传统的冠心病检测手段相比，该试剂盒具有无创伤、简便快捷、灵敏度高、价格低廉的特点。

主权项

一种人氧化低密度脂蛋白的酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：它包含如下成分：（1）包被有抗人氧化低密度脂蛋白抗体的酶标板；（2）人氧化低密度脂蛋白系列标准品：标准品1：每升标准品1含有20g牛血清白蛋白、50g蔗糖；标准品2：每升标准品2含有20g牛血清白蛋白、50g蔗糖和1U氧化低密度脂蛋白；标准品3：每升标准品3含有20g牛血清白蛋白、50g蔗糖和2U氧化低密度脂蛋白；标准品4：每升标准品4含有20g牛血清白蛋白、50g蔗糖和4U氧化低密度脂蛋白；标准品5：每升标准品5含有20g牛血清白蛋白、50g蔗糖和8U氧化低密度脂蛋白；标准品6：每升标准品6含有20g牛血清白蛋白、50g蔗糖和16U氧化低密度脂蛋白；（3）酶标记抗体：为过氧化物酶或辣根过氧化酶标记的羊抗人载脂蛋白B抗体；（4）稀释液；（5）洗涤液；（6）底物液；（7）终止液；成分（1）所述的包被有抗人氧化低密度脂蛋白抗体的酶标板是按照如下方法制备的：a、抗体稀释：用pH为8.0的50mM的Tris‑HCl缓冲溶液将抗人氧化低密度脂蛋白单克隆抗体稀释到2.5~20μg/ml，得包被液；b、包被：取微孔板，用洗涤液洗涤3次，加入上述含抗人氧化低密度脂蛋白单克隆抗体的包被液，每孔100μl/孔，4℃孵育12小时；c、封闭：倾去包被液，置于吸水纸上轻拍几次，去除残液，加入含1% 牛血清白蛋白和5%蔗糖的浓度为50mmol/L的Tris‑HCl封闭液，其pH为8.0，300μl/孔，室温，1小时；d、真空干燥，密封，即得包被有抗人氧化低密度脂蛋白抗体的酶标板；所述的单克隆抗体是由保藏号为CCTCC NO：C200304的杂交瘤细胞系产生的；所述稀释液是每升含NaCl 40g，NaH₂PO₄·2H₂O 1.184g，Na₂HPO₄·12H₂O 11.6g，牛血清白蛋白50g的水溶液；所述洗涤液是每升含NaCl 68g，NaH₂PO₄·2H₂O 6.22g，Na₂HPO₄·12H₂O 61g，Tween‑20 21ml的水溶液；所述底物液包含底物液A和底物液B，底物液A是含有TMB的水溶液，底物液B是含有H₂O₂的水溶液；所述终止液是每升含有浓硫酸108ml的水溶液。