一种抗CD20单克隆抗体及其制备方法和用途

摘要

本发明涉及一种用于抗CD20单抗及其制备方法和用途。采用仓鼠卵巢细胞CHO DG44制备得到与美罗华一致的抗CD20单抗，建立了300L真核细胞大规模高表达生产工艺，蛋白表达量在1.2g/L以上；蛋白纯化得率提高至60%以上。本发明安全有效，实用性较强，价廉，方便快捷，其制备工艺简便、容易操作，使用简便、疗效显著，为治疗B细胞诱导的恶性肿瘤、特别是非霍奇金淋巴瘤，以及自身免疫性疾病、肾衰、乙肝和丙肝、糖尿病等提供了一种新的药物来源，适于医药、生物技术领域等工业和行业的大规模生产和商业应用，应用前景良好，具有显著的社会效益、经济效益。

主权项

一种抗CD20单克隆抗体，其特征在于，所述的该抗CD20单克隆抗体是按照以下方法制备得到的：（1）构建一个独特的pMED高效哺乳动物细胞基因表达系统；（2）建立一个悬浮细胞、无血清培养驯化体系，通过转染将CD20单抗基因整合到CHO细胞的基因组中，通过逐步增加MTX的浓度使整合在细胞内的目的蛋白基因拷贝数大量扩增，筛选CHO细胞亚克隆，获得高表达工程细胞株，并建立三级种子细胞库；（3）建立适合哺乳动物细胞悬浮培养的无血清培养基，使用该无血清CD培养基培养CHO工程细胞株；（4）建立哺乳动物细胞大规模培养及蛋白纯化体系，利用哺乳动物细胞大规模发酵及纯化平台，获得外源蛋白的大规模表达；所述的CHO工程细胞株是中国仓鼠卵巢细胞CHO DG44，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C201158。