一种解除丙酮丁醇梭菌葡萄糖抑制效应的方法

摘要

本发明提供了一种解除丙酮丁醇梭菌葡萄糖抑制效应的方法，以及一种基因组中丙酮丁醇梭菌ccpA基因表达被抑制的重组菌株。本发明提供的解除丙酮丁醇梭菌葡萄糖抑制效应的方法通过抑制丙酮丁醇梭菌ccpA基因表达来实现。使用本发明提供的方法，中断了丙酮丁醇梭菌ccpA基因的表达。本发明提供的菌株中，ccpA基因经二类内含子插入失活后菌株同步利用木糖和葡萄糖的能力显著提高，同时转化生成的ABE浓度相应提高。本发明构建的工程菌株解除了葡萄糖抑制效应，能同步利用葡萄糖和木糖进行发酵，因此该菌株有利用木质纤维素水解液进行丙酮丁醇发酵的潜力。

主权项

一种解除丙酮丁醇梭菌葡萄糖抑制效应的方法，其特征在于，所述方法通过二类内含子插入技术抑制丙酮丁醇梭菌的ccpA基因表达实现，所述通过二类内含子插入技术抑制丙酮丁醇梭菌ccpA基因表达通过在丙酮丁醇梭菌ccpA基因中插入二类内含子DNA片段中断丙酮丁醇梭菌ccpA基因表达实现，包括以下步骤：首先，使用PCR扩增ccpA targetron片段，与经过同样酶切的pSY6载体连接，获得中断质粒pSY6‑ccpA，其中，PCR扩增ccpA targetron的模板及引物设计方法来源于Sigma‑Aldrich公司的Targetron^TM Gene Knockout System(TA0100)kit；然后，将pANS1质粒转化入E.coli ER2275，获得菌株E.coli ER2275／pANS1，将抽提获得的pSY6‑ccpA质粒转化入E.coli ER2275／pANS1，获得Cac824I酶切位点被甲基化的pSY6‑ccpA质粒；最后，将Cac824I酶切位点被甲基化的pSY6‑ccpA质粒转化入C.acetobutylicum ATCC824菌株获得ccpA基因中断的丙酮丁醇梭菌突变株。