一种高效生产促红细胞生成素的方法

摘要

本发明涉及促红细胞生成素生产技术领域，具体为一种通过逆向灌注方式高效生产促红细胞生成素的方法，主要包括含血清培养阶段和无血清培养阶段，并且每个阶段均包括逆流灌注和提速搅拌过程。本发明通过由生物反应器底部向上逆流灌注培养基，从而保障新鲜的培养基可均匀到达各载体间隙，使营养物质可进行充分、及时的交换，可避免细胞生长速度不一和死细胞比例增加的问题。通过间隔将转速提高至300-500rpm并保持一定时间，可进一步保障营养物质可进行充分、及时的交换，从而避免因接触面积增大而致使局部细胞密度减少、细胞分布不均匀的问题。本生产方法使细胞培养规模可达100L，从而提高产量，降低了EPO的生产成本。

主权项

一种高效生产促红细胞生成素的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将载体和CHO细胞悬液加入已灭菌的生物反应器中，然后加入含血清培养基，并将生物反应器的转速设为100‑250rpm，培养细胞12‑24h；S2、由生物反应器的底部向上连续逆流灌注含血清培养基，使生物反应器内的含血清培养基的糖浓度保持在1.5g/L以上；当糖的日消耗量≧100g/d时，停止含血清培养基培养；S3、将生物反应器中的含血清培养基更换为无血清培养基，培养细胞6‑12h；S4、由生物反应器的底部向上连续逆流灌注无血清培养基，使生物反应器内的含血清培养基的糖浓度保持在1.5g/L以上；培养细胞至细胞收获液的体外活性<3000IU/mL；S5、细胞收获液经分离、纯化得EPO。