甘蓝型油菜小孢子简化高效培养方法

摘要

本发明涉及油菜小孢子培养方法，公开了一种甘蓝型油菜小孢子简化高效培养方法，属植物新品种培育新方法。针对目前甘蓝型油菜小孢子培养中存在的问题，在取样时期、时间、方式、提取液、培养方法、加倍方法和长途无菌运输等技术方面分别行了改进，使得甘蓝型油菜小孢子培养效率大幅度提高，培养方法和培养程序简化，降低了培养成本，方便推广和应用。

主权项

甘蓝型油菜小孢子简化高效培养方法，包括取样、培养基提取小孢子、小孢子培养、胚状体的长途无菌运输及胚状体培养，其特征在于，对各环节进行了改进，具体如下：在甘蓝型油菜现蕾期、气温20℃时，H155×Qva选取每个单株上所有2.8mm～3.5mm单核靠边期的花蕾30‑50个，放入装有碎冰的离心管中；去掉碎冰，将84消毒液倒入离心管中，灭菌，其间反复上下摇晃；将灭过菌的花蕾，用4℃的无菌水洗涤；倒掉无菌水，在离心管中滴入4℃的无菌13％蔗糖溶液，快速研磨成匀浆，用尼龙网过滤小孢子至另一无菌离心管中，加4℃的无菌13％的蔗糖溶液，密封，离心，弃上清液，加含16％蔗糖的NLN液体培养基，将小孢子悬浮液分装于培养皿中，添加NLN液体培养基将培养皿底部覆盖，密封；然后将培养皿置于32℃恒温培养箱中暗培养至有肉眼可见的胚状体出现，转至摇床继续培养至胚状体长大；将胚状体转入含2％蔗糖、B₅固体培养基的三角瓶中，或者将胚状体装入含13％蔗糖、B₅液体培养基的离心管中，密封，运输；之后将胚状体转移到含2％蔗糖、B₅固体培养基的培养瓶中，在2℃低温生长箱中春化处理10d，再在25℃、16h光照及弱光下光照培养，直至移栽到温室；等再生苗长至5～10片叶时，将苗子挖出，洗净，用秋水仙素溶液浸根4‑5小时，再将苗子栽于温室；花期将有花粉的单株套袋，自交获得DH种子。