| 主权项 |
一种在大量的核酸模板中检测或测定突变或核苷酸修饰的频率的方法，该方法包括：i)将大量核酸模板和修饰的3'扩增引物或者修饰的5'扩增引物在使所述修饰的扩增引物固定于半固体支持物中的条件下包埋于所述半固体支持物中；ii)将步骤(i)获得的所述半固体支持物与聚合酶、三磷酸脱氧核苷酸(dNTPs)和未修饰的5'或者3'扩增引物接触；iii)在使所述修饰和/或未修饰的扩增引物杂交至所述核酸模板以形成与引物结合的模板的条件下处理从步骤(ii)获得的组合物；iv)在所述半固体支持物内进行所述与引物结合的模板的扩增，其中所述扩增的双链产物集中在所述与引物结合的模板的周围；v)将所述双链扩增产物变性并去除获得的未固定到所述半固体支持物中的单链；vi)将测序引物与所述步骤(v)获得的固定化的单链杂交，并在带有不同可检测标记的至少2种核苷酸存在下，对所述杂交的测序引物进行延伸以形成延伸产物，其中所述核苷酸中的一种在所述固定化单链含有所述突变或核苷酸修饰时结合到所述延伸产物中；另外的所述核苷酸在所述固定化单链不含所述突变或修饰核苷酸时结合到所述延伸产物中；以及vii)检测从步骤(vi)获得的测序引物的延伸产物，并确定包含所述突变核苷酸或修饰核苷酸的所述核酸模板的存在或频率。 |
