一种高效水体脱氮施氏假单胞菌DB-33及其培养方法

摘要

本发明公开了一种能够用于养殖水体快速脱氮的施氏假单胞菌（Pseudomonasstutzeri）DB-33，其保藏号CGMCCNo.5993。本发明还公开该菌剂的开放培养方法：用25L的塑料桶作培养装置，装入DM液体培养基20L，接入液体菌种，接菌量为20%，温度在25℃以上，用气泵通气（45w），发酵时间24小时，发酵液有效活菌数达到16亿·mL^-1。本发明发现的施氏假单胞菌可快速降解水体中的硝酸盐，亚硝酸盐，氨氮，从而改善水体环境，减少含氮污染物对水体中生物的危害，极大地降低脱氮微生物制剂的生产成本，为广大养殖户提供一种高效、安全、实用的生物脱氮技术。

主权项

一种高效水体脱氮施氏假单胞菌DB‑33的开放培养方法，其特征在于它包括斜面菌种、活化、液体菌种、塑料桶通气发酵、检验步骤；其中斜面菌种：将施氏假单胞菌（Pseudomonas stutzeri）DB‑33，保藏号CGMCC No.5993 接种在含有DM固体培养基的斜面试管中，30℃培养24h，4℃冰箱中菌种保存，所述的DM固体培养基为：柠檬酸钠5g，KNO₃  2g，KH₂PO₄ 1 g，MgSO4·7H₂O 0.2 g，蒸馏水1 000 mL，琼脂粉12g，pH7.2；活化：配置DM固体培养基，灭菌后倒入90mm 培养皿内，待冷却后，接入保存的DB‑33斜面菌株，30℃培养24h； 液体菌种：配置DM液体培养基，分装于三角瓶中，灭菌，待冷却后，挑取培养皿中活化后的菌株接入，30℃培养24h；所述的DM液体培养基为：柠檬酸钠5 g，KNO₃  2 g，KH₂PO₄ 1 g，MgSO4·7H₂O 0.2 g，蒸馏水1000 mL， pH7.2；塑料桶通气发酵：用25L的塑料桶作培养装置，旧桶用1%的次氯酸钠溶液消毒，然后用清水冲洗，新桶可用清水清洗过直接使用；装入DM液体培养基20L ，接入三角瓶中的液体菌种，接菌量为20%，温度在25℃以上，用45w气泵接入2%的次氯酸钠溶液浸泡的沙头，通气，发酵时间24小时。