一套鉴定筛选耐热瓠瓜砧木的方法

摘要

本发明一套鉴定筛选耐热瓠瓜砧木的方法，属于生物领域。建立可靠的耐热性鉴定方法，是快速筛选耐热材料进行品种选育的基础。田间自然鉴定法易受环境影响，不能准确筛选目标材料。为此，发明一套利用人工胁迫、结合统计手段、快速准确鉴定瓠瓜砧木耐热性的方法已成为当务之急。技术方案为利用瓠瓜高温种子发芽和苗期电导率测定，计算相对发芽率_{(40-45℃/30-35℃)}、相对发芽指数_{(40-45℃/30-35℃)}和相对电导率_(6h/0h)三项鉴定指标，应用SPSS13.0软件聚类功能，进行瓠瓜耐热种质鉴定筛选。发明以更简易的操作流程、更低的时间和人工成本，对瓠瓜砧木材料进行更准确更快速更便捷的耐热性鉴定。

主权项

一套鉴定筛选耐热瓠瓜砧木的方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）瓠瓜高温种子发芽：选取37份瓠瓜材料饱满无病虫正常种子各90粒，首先在55‑60℃水中温烫20min，再在30℃温水中浸种12h，浸种结束后，取出种子沥干水分，均匀摆放在铺有四层纱布的培养皿内，发芽密度为15粒/培养皿，用去离子水保湿，分作两组，45粒/组，3培养皿/组，分别在30‑35℃和40‑45℃条件下黑暗发芽；以种子胚芽长达种子一半时为发芽标准，每天用去离子水冲洗种子1次，并统计当天发芽数，发芽于两周后停止，依照下列公式，计算30‑35℃和40‑45℃两个温度下瓠瓜种子的发芽率和发芽指数：发芽率＝(种子总发芽数/供试种子数)×100％发芽指数＝∑(GT/DT)，其中，GT是在时间t日的发芽数，DT是相应的发芽日数；依照下列公式，计算40‑45℃下瓠瓜种子的相对发芽率和相对发芽指数：相对发芽率_{(40‑45℃/30‑35℃)}＝发芽率_(40‑45℃)/发芽率_(30‑35℃)相对发芽指数_{(40‑45℃/30‑35℃)}＝发芽指数_(40‑45℃)/发芽指数_(30‑35℃)（2）苗期高温电导率测定播种37份瓠瓜材料各16株，待植株长至两叶一新，其中第3叶为幼叶，转入光照培养箱，在45‑50℃条件下热处理6h，分别在热处理前和处理6h取样，测定电导率，每次取样避开主叶脉用直径为0.6cm打孔器随机取圆片，每株取圆片一个，重复3次，取样后，首先测定的电导率值记为EC₀；45℃水浴15min，冷却后测定值为EC₁；100℃水浴15min，冷却后测定值为EC₂，根据下列公式计算处理前和处理6h电导率：电导率＝(EC₂‑EC₀)/(EC₁‑EC₀)；依照下列公式，计算处理6h的相对电导率：相对电导率_(6h/0h)＝电导率_(6h)/电导率_(0h)；（3）SPSS13.0软件聚类功能进行瓠瓜耐热种质鉴定筛选：利用SPSS13.0软件聚类程序：Analysis——Classify——Hierarchical Cluster，选择37份瓠瓜材料相对发芽率_{(40‑45℃/30‑35℃)}、相对发芽指数_{(40‑45℃/30‑35℃)}和相对电导率_(6h/0h)作为变量，进行聚类。