耐药基因TetK LAMP检测试剂盒及其检测方法

摘要

本发明涉及一种用环介导等温扩增(LAMP)技术快速检测耐药基因TetK的试剂盒及检测方法。本发明含有10X等温反应缓冲液、Bst DNA聚合酶8Μ/μL、l0mM dNTP、100mM硫酸镁、10μM内引物1、10μM内引物2、l0μM外引物1、10μM外引物2和4M甜菜碱的反应液A、反应液B（50mM MgCl₂）和反应液C（100X的荧光染料SYBR GreenⅠ）。通过对细菌基因组DNA提取、耐药基因TetK的环介导等温扩增、扩增产物的显色检测，从而检测出耐药基因TetK。解决了现有技术时间长、工作量大、交叉污染、操作复杂等缺陷。本发明具有特异性强、灵敏度高、快速且成本低、操作方法更简单，适于现场快速检测。

主权项

一种耐药基因TetK LAMP检测试剂盒，包括以下成分:（1）反应液A：含有10×等温反应缓冲液、Bst DNA聚合酶8U/μL、l0mM dNTP、10μM内引物1、10μM内引物2、10μM外引物1、10μM外引物2和4M甜菜碱，其中：10×等温反应缓冲液含有200mM pH8.8三羟基甲基氨基甲烷盐酸盐，100mM氯化钾、100mM硫酸铵、20mM硫酸镁和pH8.8、25℃的1%曲拉通X‑100;内引物1为:ACAACCACCATAATCAGTGAAGGG‑TTGATTTTTGGTAGGTTAGTACA内引物2为:AACAAGGCAAAGCCTTTGGT‑CCCCTATTGAAGGACCTAAC外引物1为:ATTGCTTTTATTGGTCACAATC外引物2为:AGACCAATGAATATAATGTGCTA（2）反应液B：50mM MgCl₂（3）反应液C：100×的荧光染料SYBR Green I。