产生肺炎链球菌(STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE)荚膜多糖的缩短的纯化方法

摘要

本发明阐述自肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)细胞溶解产物培养液产生含有基本上纯化的荚膜多糖的溶液的经缩短方法。超滤并透析过滤澄清肺炎链球菌溶解产物，之后将pH调节至4.5以下、优选地约3.5，从而使溶液中至少98％的蛋白质沉淀而不严重影响多糖产率。此外，在超滤和透析过滤并酸化至低于4.5的pH后，使用活性炭进行过滤，使至少90％的剩余蛋白质沉淀而不严重影响多糖产率。可使用本发明经缩短方法来纯化的实例性非限制性肺炎链球菌血清型为1、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F。在一个实施例中，使用脱氧胆酸钠(DOC)溶解肺炎链球菌细胞；而在另一实施例中溶解剂为非动物源性溶解剂，例如N-月桂酰肌氨酸钠(NLS)。

主权项

一种自肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)细胞溶解产物产生含有基本上纯化的荚膜多糖的溶液的方法，所述方法包含以下步骤：(a)提供包含可产生选定肺炎链球菌血清型的细菌细胞的发酵培养液；(b)用溶解剂溶解所述步骤(a)中的细菌细胞，由此产生包含细胞碎片、可溶蛋白、核酸和多糖的细胞溶解产物；(c)使用离心或过滤去除细胞碎片来澄清所述步骤(b)中的细胞溶解产物，由此产生澄清细胞溶解产物；(d)超滤并透析过滤所述步骤(c)中的澄清细胞溶解产物以去除低分子量杂质并提高多糖浓度，由此产生渗余物；(e)使所述步骤(d)中的渗余物的pH降低至4.5以下以使蛋白质与核酸沉淀，由此形成酸化渗余物溶液；(f)将所述步骤(e)中形成的酸化渗余物溶液保持足够长时间以使所述沉淀物沉降，之后过滤或离心所述酸化渗余物溶液，由此产生澄清多糖溶液；(g)通过活性炭过滤器过滤所述步骤(f)中的澄清多糖溶液；(h)超滤并透析过滤所述步骤(g)产生的经过滤溶液，由此产生经浓缩纯化多糖溶液，其中所述步骤(h)的透析过滤包含将pH调节至5.5至7.5之间；和(i)使用无菌过滤器过滤所述步骤(h)产生的经浓缩纯化多糖溶液；由此产生含有基本上纯化的荚膜多糖的溶液。