发明名称 一种适用于从鱼血液中快速提取基因组DNA的方法
摘要 一种适用于从鱼血液中快速提取基因组DNA的方法,它涉及一种提取基因组DNA的方法。本发明要解决现有从鱼血液中提取基因组DNA的过程中存在提取过程繁琐、成本高、提取的基因组DNA纯度不高及保存时间短的问题。本发明过程:一、鱼血液样本制备:将于血液加入裂解液中混合均匀,得到鱼血液样本,裂解液中EDTA摩尔浓度为90~110mmol/L;二、鱼血液样本消化处理后,经酚-氯仿-异戊醇混合液抽提,离心后得上清液再经氯仿-异戊醇混合液抽提,得血液基因组DNA消化液;三、用无水乙醇将DNA消化液沉淀,沉淀再经70%乙醇洗涤,干燥后得鱼血液基因组DNA沉淀,即完成提取DNA的过程。本发明应用在基因技术领域。
申请公布号 CN103756999A 申请公布日期 2014.04.30
申请号 CN201410053143.9 申请日期 2014.02.17
申请人 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所 发明人 闫学春;栾培贤
分类号 C12N15/10(2006.01)I 主分类号 C12N15/10(2006.01)I
代理机构 哈尔滨市松花江专利商标事务所 23109 代理人 侯静
主权项 一种适用于从鱼血液中快速提取基因组DNA的方法,其特征在于适用于从鱼血液中快速提取基因组DNA的方法,按照下述步骤进行:一、鱼血液样本制备:①、采用一次性无菌注射器在鱼的尾部位提取血液0.1mL~0.2mL;②、将步骤①中取到的血液20μL~30μL加入到含有800μL裂解液的离心管中,反复颠倒至混合均匀为止,得到鱼血液样本;其中,所述的裂解液中EDTA的摩尔浓度为90mmol/L~110mmol/L,裂解液中Protainase K的摩尔浓度为100μg/mL~200μg/mL,裂解液中十二烷基肌氨酸钠的质量浓度0.5%,裂解液pH为8.0;二、将含有步骤一中得到的鱼血液样本的离心管置于温度为55℃水浴中消化1h~1.5h,然后用酚‑氯仿‑异戊醇混合液抽提2次,在10000r/min的条件下离心6min~7min,得到上清液A,再在上清液A中加入与上清液A等体积的氯仿‑异戊醇混合液抽提1次,在10000r/min的条件下离心6min~7min,得到上清液B,上清液B为血液基因组DNA消化液;其中,所述的酚‑氯仿‑异戊醇混合液中酚、氯仿和异戊醇的体积比为25:24:1,所述的氯仿‑异戊醇混合液中氯仿与异戊醇的体积比为24:1;所述的酚‑氯仿‑异戊醇混合液与鱼血液样本的体积比为1:1;三、在温度为‑20℃的条件下,将无水乙醇加入到步骤二得到的血液基因组DNA消化液中进行沉淀,沉淀时间为2h~4h,然后在12000r/min的条件下离心15min~20min,得到沉淀,再将得到的沉淀用质量百分含量为70%的乙醇洗涤1次,洗涤后在7500r/min的条件下离心5min~6min,弃上清液后干燥,得到鱼血液基因组DNA沉淀,即完成从鱼血液中提取基因组DNA的过程;其中,所述的无水乙醇与血液基因组DNA消化液的体积比为2:1。
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