主权项 |
一种适用于从鱼血液中快速提取基因组DNA的方法,其特征在于适用于从鱼血液中快速提取基因组DNA的方法,按照下述步骤进行:一、鱼血液样本制备:①、采用一次性无菌注射器在鱼的尾部位提取血液0.1mL~0.2mL;②、将步骤①中取到的血液20μL~30μL加入到含有800μL裂解液的离心管中,反复颠倒至混合均匀为止,得到鱼血液样本;其中,所述的裂解液中EDTA的摩尔浓度为90mmol/L~110mmol/L,裂解液中Protainase K的摩尔浓度为100μg/mL~200μg/mL,裂解液中十二烷基肌氨酸钠的质量浓度0.5%,裂解液pH为8.0;二、将含有步骤一中得到的鱼血液样本的离心管置于温度为55℃水浴中消化1h~1.5h,然后用酚‑氯仿‑异戊醇混合液抽提2次,在10000r/min的条件下离心6min~7min,得到上清液A,再在上清液A中加入与上清液A等体积的氯仿‑异戊醇混合液抽提1次,在10000r/min的条件下离心6min~7min,得到上清液B,上清液B为血液基因组DNA消化液;其中,所述的酚‑氯仿‑异戊醇混合液中酚、氯仿和异戊醇的体积比为25:24:1,所述的氯仿‑异戊醇混合液中氯仿与异戊醇的体积比为24:1;所述的酚‑氯仿‑异戊醇混合液与鱼血液样本的体积比为1:1;三、在温度为‑20℃的条件下,将无水乙醇加入到步骤二得到的血液基因组DNA消化液中进行沉淀,沉淀时间为2h~4h,然后在12000r/min的条件下离心15min~20min,得到沉淀,再将得到的沉淀用质量百分含量为70%的乙醇洗涤1次,洗涤后在7500r/min的条件下离心5min~6min,弃上清液后干燥,得到鱼血液基因组DNA沉淀,即完成从鱼血液中提取基因组DNA的过程;其中,所述的无水乙醇与血液基因组DNA消化液的体积比为2:1。 |