鲁米诺直接键合的纳米金核酸分析探针及其应用

摘要

本发明公开了一种鲁米诺直接键合的纳米金核酸分析探针及其化学发光分析新方法。其一是鲁米诺直接键合的纳米金核酸分析探针，该分析探针是由鲁米诺直接键合的纳米金标记的核酸所组成。其中，鲁米诺直接键合的纳米金是由鲁米诺一步还原氯金酸得到的。其二是基于该鲁米诺直接键合的纳米金核酸分析探针的化学发光分析方法。其三是实施该分析方法的试剂盒。本发明的基于核酸分析探针的化学发光分析方法具有灵敏度高(如测定特定序列的单链DNA检测限可达1.9×10^-16mol/L)、线性范围宽、重现性好、操作简单、成本低廉等优点，可用于各种样品中的DNA、RNA、适配体对应配体的测定。在临床诊断与治疗、药物分析、食品安全检测、环境监测等领域具有广阔的应用前景。

主权项

一种基于核酸分析探针的化学发光分析方法，包括如下步骤：A、合成核酸分析探针；所述核酸分析探针，是由鲁米诺直接键合的纳米金标记核酸分子形成的，其中所述鲁米诺直接键合的纳米金作为标记物；B、在固相载体上组装具有连接功能的修饰层，形成修饰层／固相载体；C、孵育捕获探针与步骤B得到的修饰层／固相载体，使捕获探针连接到修饰层／固相载体上，形成捕获探针／修饰层／固相载体复合物；D、孵育目标分析物与步骤C所得到的捕获探针／修饰层／固相载体复合物，使捕获探针／修饰层／固相载体复合物与目标分析物结合，形成目标分析物／捕获探针／修饰层／固相载体复合物；E、孵育步骤D所得到的目标分析物／捕获探针／修饰层／固相载体复合物与步骤A所得到的核酸分析探针，形成核酸分析探针／目标分析物／捕获探针／修饰层／固相载体夹心式核酸复合物；F、将步骤E所得到的核酸分析探针／目标分析物／捕获探针／修饰层／固相载体夹心式核酸复合物放入化学发光池中，加入底液，产生化学发光，用发光仪进行检测；所述目标分析物来自药物、水样品、生物样品、空气样品、食品样品和饮料样品之一；所述基于核酸分析探针的化学发光分析方法为非疾病诊断和治疗方法；所述的捕获探针为端基修饰有基团的核酸分子；所述基团为生物素或巯基；所述核酸分子为DNA或RNA；所述修饰层由下述1)和2)的物质组成：1)具有连接功能的桥连分子或具有连接功能的桥连基团；2)连接有链霉亲和素的纳米金；所述连接有链霉亲和素的纳米金通过所述桥连分子或所述桥连基团连接到所述固相载体上；所述鲁米诺直接键合的纳米金是利用鲁米诺还原氯金酸得到的；所述标记的方法为下述1)或2)的方法：1)将所述核酸分子端基修饰生物素，然后通过链霉亲和素与所述鲁米诺直接键合的纳米金连接；2)将所述核酸分子端基修饰巯基，然后与所述鲁米诺直接键合的纳米金连接；所述核酸分析探针为化学发光核酸分析探针。