b型流感嗜血杆菌荚膜多糖纯化工艺

摘要

本发明公开了b型流感嗜血杆菌荚膜多糖纯化工艺，它包括以下步骤：a.用缓冲液A平衡离子交换层析柱2个柱体积；b.用20mMTirs，1%（w/v）脱氧胆酸钠，pH8.0溶液溶解粗多糖，过滤后，将滤液上样于已经平衡好的离子交换层析柱；c.用缓冲液A和缓冲液B的线性梯度洗脱，收集206nm吸收值较高，280nm吸收值较低的洗脱峰；d.将收集的洗脱峰上样于平衡好的SephadexG-25凝胶柱，收集206nm的吸收峰。本发明的有益效果是：质量指标可达到行业标准，纯化过程不使用苯酚，避免了对人体健康和环境造成的危害，减少了处理步骤中可能造成的污染与损失，操作简单、方便，有利于规模化生产。

主权项

b型流感嗜血杆菌荚膜多糖纯化工艺，其特征在于：它包括以下步骤：a、用20mM Tris，pH8.0缓冲液A平衡离子交换层析柱2个柱体积直至电导基线平稳并且与上柱之前的缓冲液的电导值一致；b、用20mM Tris，1%（w/v）脱氧胆酸钠，pH8.0溶液溶解粗多糖，使得溶解后的溶液中多糖浓度为5～10mg/ml，用0.45μm的滤膜澄清过滤后，将滤液上样于已经平衡好的离子交换层析柱；c、采用20mM Tris，pH8.0缓冲液A和20mM Tris，1M NaCl，pH8.0缓冲液B线性梯度洗脱上样后的离子交换层析柱，监测吸收波长为206nm和280nm的吸收曲线，收集206nm吸收值较高，280nm吸收值较低的洗脱峰；d、将收集的洗脱峰上样于预先用生理盐水平衡好的Sephadex G‑25凝胶柱，监测吸收波长为206nm的吸收曲线，收集206nm的吸收峰，即得b型流感嗜血杆菌荚膜多糖纯化样品。