| 摘要 |
1. Способ получения рекомбинантного белка интерферона I типа, причем упомянутый способ включает:экспрессию рекомбинантного белка интерферона культивированием клетки-хозяина Pseudomonas или E.coli, содержащей экспрессионную конструкцию, причем упомянутая экспрессионная конструкция содержит нуклеиновую кислоту, содержащую кодирующую последовательность для интерферона I типа, которая была оптимизирована для экспрессии в клетке-хозяине;лизис культиворованной клетки-хозяина;получение нерастворимой фракции и растворимой фракции из лизированной клетки-хозяина;экстрагирование нерастворимой фракции подверганием ее неденатурирующим условиям экстракции, причем упомянутые неденатурирующие условия экстракции включают цвиттерионный детергент или октилглюкопиранозид; иполучение осадка экстракта и супернатанта экстракта из экстрагированной нерастворимой фракции;причем рекомбинантный белок в супернатанте экстракта присутствует в растворимой форме, активной форме или их комбинации, без необходимости осуществления дополнительной стадии его ренатурации или рефолдинга.2. Способ по п.1, в котором кодирующая последовательность для интерферона I типа является функционально связанной с производным промотора lac, причем культивирование включает:выращивание клетки-хозяина при температуре от около 25°C до около 33°C и при значении рН от около 5,7 до около 6,5, до значения OD, равного от около 80 до около 160, ииндукцию клетки-хозяина IPTG в концентрации, равной от около 0,08 мМ до около 0,4 мМ.3. Способ по п.1, в котором цвиттерионный детергент представляет собой Zwittergent 3-08, Zwittergent 3-10, Zwittergent 3-12, Zwittergent 3-14 или CHAPS.4. Способ по п.3, в котором неденату� |
