| 主权项 |
麒麟尾种苗组培快繁方法，其特征在于：通过以下步骤实现：一、外植体选择培育按常规管理母株，在4‑10月份，当母株抽出3‑5个节，且新萌发的顶芽长度约10‑40mm时，即可采集母株新萌发的顶芽或侧芽作为外植体，采集的外植体长度约10‑20mm；二、无菌材料获得：将采集好的外植体清洁漂洗后，切去截面变色部分，接种于培养基中进行第一代无菌材料的培养；此培养基采用MS改良培养基，并添加有柠檬酸80‑100mg·L‑1，6‑苄基腺嘌呤（6‑BA）1.0‑5.0mg·L‑1，糠基腺嘌呤（KT）1.0‑4.0mg·L‑1，a‑萘乙酸（NAA）0.1‑0.5mg·L‑1，蔗糖30‑40g·L‑1和卡拉胶4.5‑6.5g·L‑1，调整pH值为5.6‑6.0，后进行灭菌；培养条件：温度26±1℃，光照12±2H/D,光强3.75‑6.25μmol·m‑2·s‑1，湿度40‑70%，培养周期4‑5周；三、无菌材料的驯化与继代扩繁：（一）无菌材料的驯化第一代无菌材料培养后当新芽抽出长度大于20mm时，去顶留8‑10mm，如侧芽分化时，以2‑4芽/团进行方向性切割，将切割好的芽团接种于培养基中进行驯化培养，此培养基采用MS改良培养基，并添加有柠檬酸80‑100mg·L‑1、6‑BA1.0‑3.0mg·L‑1、KT2.0‑4.0mg·L‑1、NAA0.1‑0.5mg·L‑1、蔗糖30‑40g·L‑1和卡拉胶4.5‑6.5g·L‑1，调整pH值为5.6‑6.0，后进行灭菌；培养条件：温度26±1℃，光照12±2H/D,光强18.75‑22.5μmol·m‑2·s‑1，湿度40‑70%，培养周期4‑6周；按上述方式进行4‑5次（代）驯化培养后即完成驯化，进入扩繁阶段；（二）无菌材料的继代扩繁进入扩繁阶段的材料每个芽团有12‑20个芽，对芽粗度大于2.5mm的粗芽按2‑4芽/团进行切割，并采用对剖方式破坏其生长点，若新芽抽出长度大于20mm，去顶留8‑10mm；对芽粗度小于或等于2.5mm的细小芽则以8‑10mm的团块直径进行切割，将切割好的芽团接种于MS改良培养基中进行扩繁培养，并在MS改良培养基中添加柠檬酸80‑100mg·L‑1，6‑BA0.1‑3.0mg·L‑1、KT2.0‑4.0mg·L‑1、NAA0.1‑0.5mg·L‑1、蔗糖30‑40g·L‑1和卡拉胶4.5‑6.5g·L‑1，调整pH值为5.6‑6.0，后进行灭菌；培养条件：温度26±1℃，光照12±2H/D,光强18.75‑22.5μmol·m‑2·s‑1，湿度40‑70%，培养周期5‑6周；四、壮苗生根培养：（一）壮苗培养将经扩繁培养后的芽团按2‑4芽/团方向性切割后，将切下的团块接种到壮苗培养基中，壮苗培养基采用MS改良培养基，并添加柠檬酸80‑100mg·L‑1，KT0.5‑1.0mg·L‑1、NAA0.1‑0.3mg·L‑1、蔗糖30‑40g·L‑1和卡拉胶4.5‑6.5g·L‑1，调整pH值为5.6‑6.0，后进行灭菌；培养条件：温度26±1℃，光强14±2H/D，光照18.75‑22.5μmol·m‑2·s‑1，湿度40‑70%，培养周期5‑6周；（二）生根培养当团块上的芽长度达15‑20mm、具有两片完整叶且叶片平展时，按单芽进行切割，切下来的单芽接种到生根培养基中进行生根培养，生根培养基采用MS改良培养基，并添加柠檬酸80‑mg·L‑1，吲哚丁酸（IBA）1‑3mg·L‑1、NAA0.2‑0.5mg·L‑1、活性炭100‑300mg·L‑1、蔗糖40g·L‑1和卡拉胶4.5‑6.5g·L‑1，调整pH值为5.6‑6.0，后进行灭菌；培养条件：温度26±1℃，光照时间14±2D，光强25‑31.25μmol·m‑2·s‑1，湿度40‑70%；生根培养14D后开始长根，6‑8周后长根率达95%，根数3‑6条，植株高度达30‑65mm，具有3片完整叶，长势健壮；上述各步骤中的MS改良培养基是指在常规的MS培养基中添加220mg.L‑1Ca(NO3)2.4H2O，且KNO3用量由1900mg.L‑1增加到2100mg.L‑1。 |
