HPLC-DAD法同时测定苦碟子注射液中六种黄酮类成分的方法

摘要

本发明涉及一种HPLC-DAD法同时测定苦碟子注射液中六种黄酮类成分的方法。其步骤如下：（1）对照品溶液的制备。（2）供试品溶液的制备。取苦碟子注射液，用0.45μm微孔滤膜过滤，作为供试品溶液，待测。（3）测定法:采用HPLC-DAD法分别精密吸取混合对照品溶液和供试品溶液，注入检测器，测定，即得。色谱条件：色谱柱：DiamonsilC18；甲酸-水（A）甲酸-乙腈（B）；0-10min：90%A-81%A；10-26min：81%A-80%A；26-36min：80%A-72%A；36-40min：72%A-70%A；40-50min：70%A-70%A；检测波长：330nm；流速：1mL/min；柱温：35℃；进样量10μL。该方法简便、快速，结果可靠，重现性好，可应用于测定苦碟子注射液中的多种黄酮类成分。

主权项

一种HPLC‑DAD法同时测定苦碟子注射液中六种黄酮类成分的方法，其特征在于步骤如下：（1）对照品溶液的制备：  分别精密称取木犀草素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖醛酸苷、芹菜素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖醛酸苷；木犀草素、芹菜素、木犀草素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖苷、芹菜素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖苷对照品，加甲醇溶解并稀释成质量浓度分别为140.0、160.0、16.00、120.0、16.00、10.00 μg·mL‑1的混合溶液，超声溶解，即得混合对照品储备液，待用；（2）供试品溶液的制备：   取苦碟子注射液，用0.45 μ m微孔滤膜过滤，作为供试品溶液，待测；（3）测定法: 采用HPLC‑DAD法分别精密吸取混合对照品储备液和供试品溶液，注入检测器，测定，即得；色谱条件：色谱柱：Diamonsil C18；甲酸‑水（A）甲酸‑乙腈（B）；0‑10 min：90% A‑81% A；10‑26 min：81% A‑80% A；26‑36 min：80% A‑72% A；36‑40 min：72% A‑70% A；40‑50 min：70% A‑70% A；检测波长：330 nm；流速：1 mL / min；柱温：35 ℃；进样量10 μL；步骤（3）测定法中包括线性关系测定；即精密量取混合对照品储备液5mL置10 mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得木犀草素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖苷、木犀草素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖醛酸苷、芹菜素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖苷、芹菜素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖醛酸苷、木犀草素、芹菜素浓度分别为70.00、80.00、8.000、60.00、8.000、5.000 μg·mL‑1的混合溶液；再取出5 mL至10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度， 即得木犀草素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖苷、木犀草素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖醛酸苷、芹菜素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖苷、芹菜素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖醛酸苷、木犀草素、芹菜素浓度分别为35.00、40.00、4.000、30.00、4.000、2.500 μg·mL‑1的混合溶液；再取出5 mL至10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度， 即得木犀草素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖苷、木犀草素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖醛酸苷、芹菜素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖苷、芹菜素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖醛酸苷、木犀草素、芹菜素浓度分别为17.50、20.00、2.000、15.00、2.000、1.250 μg·mL‑1的混合溶液；再取出5 mL至10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度， 即得木犀草素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖苷、木犀草素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖醛酸苷、芹菜素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖苷、芹菜素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖醛酸苷、木犀草素、芹菜素浓度分别为8.750、10.00、1.000、7.500、1.000、0.625 μg·mL‑1的混合溶液；再取出5 mL至10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度， 即得木犀草素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖苷、木犀草素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖醛酸苷、芹菜素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖苷、芹菜素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖醛酸苷、木犀草素、芹菜素浓度分别为4.375、5.000、0.500、3.750、0.500、0.313 μg·mL‑1的混合溶液；再取出5 mL至10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度， 即得木犀草素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖苷、木犀草素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖醛酸苷、芹菜素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖苷、芹菜素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖醛酸苷、木犀草素、芹菜素浓度分别为2.188、2.500、0.250、1.875、0.250、0.156 μg·mL‑1的混合溶液；此为系列标准溶液；取系列标准溶液10 mL，将得到的不同浓度的混合对照品溶液按色谱条件下进行分析并记录峰面积；或步骤（3）测定法中包括精密度测定；即精密吸取低、中、高三种浓度的混合标准品溶液：低浓度 木犀草素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖苷、木犀草素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖醛酸苷、芹菜素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖苷、芹菜素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖醛酸苷、木犀草素、芹菜素的浓度分别为 8.750、10.00、1.000、7.500、1.000、0.625 μg·mL‑1的混合溶液；中浓度分别为 17.50、20.00、2.000、15.00、2.000、1.250 μg·mL‑1的混合溶液；高浓度分别为35.00、40.00、4.000、30.00、4.000、2.500 μg·mL‑1的混合溶液，在色谱条件下，每种浓度重复进样6次，每次10 μL，计算各对照品色谱峰面积以及相对标准偏差；或步骤（3）测定法中包括重复性实验；即取供试品溶液，在色谱条件下，分别进样分析6次，每次10 μL，计算各对照品色谱峰面积和相对标准偏差；或步骤（3）测定法中包括稳定性实验；即取供试苦碟子注射液 ，室温放置，于0、2、4、6、8、12 h进样，在色谱条件下进样分析，记录峰面积；或步骤（3）测定法中包括回收率实验；即精密量取苦碟子注射液 5.0 mL，平行6份，分别置于10 mL量瓶中，分别精密加入混合对照品储备液5.0 mL，其中木犀草素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖苷 70.00 μg·mL‑1、木犀草素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖醛酸苷 77.00 μg·mL‑1、芹菜素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖苷 0.56 μg·mL‑1、芹菜素7‑O‑β‑D吡喃葡萄糖醛酸苷 18.00 μg·mL‑1、木犀草素0.40 μg·mL‑1、芹菜素 0.24 μg·mL‑1摇匀，在色谱条件下进样分析，记录峰面积，计算加样回收率。