H1N1、PRRSV、CSFV四重检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种四重同步核酸定量检测试剂盒、检测方法、引物及其探针，属于生物技术领域。该试剂盒包括PCR反应液，其中包括DEPC处理水、Taq酶、M-MLV反转录酶、RNase抑制剂、dNTPMix、10×一步法RT-PCRBuffer、MgCl2溶液、SEQIDNo.1～12所示的针对H1N1流感病毒、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪瘟病毒的引物和探针；试剂盒中还包括RNA提取液、阴性质控品、工作标准品、阳性质控品和临界阳性质控品。本发明采用实时荧光定量PCR技术定量检测甲型H1N1流感病毒、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪瘟病毒核酸，具有特异、灵敏、快速、操作简便的优点。

主权项

一种甲型H1N1流感病毒、高致病性猪繁殖与综合征病毒及猪瘟病毒核酸定量检测引物和探针，包括如下的序列组：1）包括下述正向引物，反向引物和荧光探针的四组序列：a）针对甲型H1N1流感病毒matrix基因正向引物：5'‑CATGGARTGGCTAAAGAC‑3'，反向引物：5'‑WAGGGCATTTTGGACAAA‑3'，荧光探针：5'‑CCAATCTTGTCACCTCT‑3'，下标为LNA修饰；b）针对甲型H1N1流感病毒haemagglutinin基因正向引物：5'‑TGCTGGATCTGGTATTATC‑3'，反向引物：5'‑ATCGGATGTATATTCTGAAATG‑3'，荧光探针：5'‑TCAGATACACCAGTCCAC‑3'，下标为LNA修饰；c）针对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因正向引物：5'‑CTTYCTTCTGGACACTAAG‑3'，反向引物：5'‑CTCTGGTTAWAGGGGTTG‑3'，荧光探针：5'‑AACCRTCAAGCACAACTC‑3'，下标为LNA修饰；d）针对猪瘟病毒E2基因正向引物：5'‑AACGGYAGTGCTTTCTAYC‑3'，反向引物：5'‑GTGGRAAAGGCTTCTCTC‑3'，荧光探针：5'‑ACCACTTCTGTYCTCA‑3'，下标为LNA修饰；其中，所述4种探针分别使用四种激发不同荧光信号的荧光基团；所述序列中,Y为C或T，R为A或G，W为A或T。