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六味地黄制剂中葡萄糖二酸盐及葡萄糖二酸1,4内酯含量测定方法，其特征在于包括： 1）葡萄糖二酸盐和葡萄糖二酸1，4内酯标准溶液的制备：分别精密称取葡萄糖二酸盐和葡萄糖二酸1，4内酯两种对照品40.0mg，定量转移至10.0mL容量瓶中，加水稀释到刻度，精密移取5.0mL至10.0mL容量瓶中，加80%乙腈稀释至刻度，配制成200.0ug/mL溶液，作为对照品母溶液；2）HPLC‑HILIC‑UV/ELSD法测定六味地黄丸中总葡萄糖二酸盐的含量：取六味地黄丸，粉碎，精密称取500mg，加入4.0mL 2‑5%Na2CO3溶液超声20min，离心，沉淀再用等体积上述溶液提取一次，离心，合并上清液；采用C18 SPE小柱萃取，收集5%甲醇洗脱部分，用高速真空离心，干燥机55℃干燥，干燥物准确加入1.0mL 80%乙腈，10，000转离心10min取上清液进行HPLC‑HILIC‑UV/ELSD分析，以标准曲线法对葡萄糖二酸盐进行定量；HPLC‑HILIC‑UV法色谱条件：色谱柱为ZIC‑HILIC 长250mm,内径4.6mm, 颗粒度5um；以乙腈‑5mM磷酸二氢铵为流动相，两者体积比为78:22恒度洗脱；流速0.8mL/min；检测波长205nm；进样10ul，柱温30℃；HPLC‑HILIC‑ELSD法色谱条件：色谱柱为ZIC‑HILIC ZIC‑HILIC 长250mm,内径4.6mm, 颗粒度5um；以乙腈A相‑0.02%醋酸胺B相为流动相梯度洗脱：0‑5min A相80%，5‑25min A相80%‑75%，25‑30min A相为75%‑50%，30‑35min A相为50%‑80%；流速0.8mL/min；进样10ul，漂移管温度60℃ 气流1.2L/min；3）六味地黄丸中葡萄糖二酸1,4内酯含量测定：取六味地黄丸，粉碎，精密称取500mg，加4.0 mL 60%甲醇溶液，超声20min，5,000转离心10min取上清液，残渣继续加4.0mL 60%甲醇溶液，超声20min，5,,000转离心10min取上清液，合并上清液，14,000转离心后适当稀释进样UPLC‑MS/MS分析；色谱条件：Waters BEH C18色谱柱，长50mm,内径1.0 mm,粒径1.7um，柱温：40℃；流动相：A相为10mM甲酸，B相为乙腈；流速0.4mL/min；质谱条件：电喷雾负离子源ESI‑，电压2000V， source temp 100℃, 锥孔电压15V，脱溶剂气温度300℃，锥孔气和脱溶剂气流量分别为50和600L/min；全扫描模式50~1200amu；二级碰撞能量15V；分子离子峰191的碎片峰85的强度用于葡萄糖1.4‑内酯的定量；以标准曲线法对葡萄糖二酸1，4内酯进行定量；4）六味地黄丸中葡萄糖二酸盐及葡萄糖二酸1,4内酯同时检测：取六味地黄丸，粉碎，精密称取500mg，加4.0 mL 60%甲醇溶液，超声20min，5,000转离心10min取上清液，残渣继续加4.0mL 60%甲醇溶液，超声20min，5,,000转离心10min取上清液，合并上清液，14,000转离心后适当稀释进样HPLC‑LILIC‑UV分析；HPLC‑HILIC‑UV法色谱条件：色谱柱为ZIC‑HILIC 长250mm,内径4.6mm, 颗粒度5um；以乙腈A相‑5mM磷酸二氢铵+1.0%磷酸B相为流动相，流动相梯度洗脱程序：0‑3min A相83%，3‑15min A相83‑65%，15‑18min A相65%，18‑20min A相65‑83%，20‑30min A相83%；检测波长205nm；进样10ul，柱温30℃；以标准曲线法对葡萄糖二酸盐和葡萄糖二酸1，4内酯进行同时定量。 |
