发明名称 |
杀灭耐药烟曲霉的组合物及方法 |
摘要 |
一种杀灭耐药烟曲霉的组合物及方法,属于生物技术领域。一种杀灭耐药烟曲霉的方法,包括制备药物、收集菌株、制备孢子悬液、药物敏感试验和联合药敏试验,先通过本发明步骤获得两性霉素B和肉桂醛的最低抑菌浓度MIC,再利用两性霉素B和肉桂醛不同浓度的药物组合来达到杀灭耐药烟曲霉菌的作用。 |
申请公布号 |
CN103690554A |
申请公布日期 |
2014.04.02 |
申请号 |
CN201310720481.9 |
申请日期 |
2013.12.24 |
申请人 |
广西医科大学 |
发明人 |
陈一强;黄宏;孔晋亮;温汉春 |
分类号 |
A61K31/7048(2006.01)I;A61P31/10(2006.01)I;A61K31/11(2006.01)N |
主分类号 |
A61K31/7048(2006.01)I |
代理机构 |
广州市红荔专利代理有限公司 44214 |
代理人 |
李珊 |
主权项 |
一种杀灭耐药烟曲霉的方法,其特征在于,包括制备药物、收集菌株、制备孢子悬液、药物敏感试验和联合药敏试验,具体检测步骤如下:1)制备药物 将4~5mg两性霉素B和300~500mg肉桂醛,分别用3~5ml 100%的二甲亚砜溶解,并将溶液配成浓度为1280μg/ml和102400μg/ml,于‑20~‑25℃储存;2)收集菌株 收集烟曲霉菌株,质控菌株为近平滑念珠菌; 3)制备孢子悬液 将步骤2)收集的菌株接种到PDA培养皿上,置于35~37℃生化培养箱进行复苏,后转至另一PDA培养皿并置于35~37℃生化培养箱活化3~5天后,用5~10ml含有0.025%吐温20的磷酸盐缓冲液冲洗平皿表面收集孢子,用20~30ml MOPS缓冲的RPMI‑1640重悬孢子,用血细胞计数板调整孢子浓度,并用RPMI‑1640液体培养液调整浓度为1~3×106·孢子·ml‑1,再用RPMI‑1640液体培养基稀释50倍,得到2倍终浓度的孢子悬液;4)药物敏感试验 微量液基稀释法,将步骤1)制备的两性霉素B和肉桂醛分别置于无菌的2个96孔细胞培养板的第1至第10孔,第1孔加入量为100μl,第2~10孔依次以二倍稀释法至终浓度,再将步骤3)制备的孢子悬液加入滴1至第10孔,每孔加入量为1ml,第11孔为步骤3)制备孢子悬液的生长对照孔,第12孔为RPMI‑1640液体培养基,静置于35~37℃培养48h,分别获得两性霉素B和肉桂醛的最低抑菌浓度MIC;5) 联合药物试验 在无菌96孔细胞培养板上加入两性霉素B和肉桂醛,前8列加入两性霉素B和肉桂醛,加入两性霉素B的浓度为1/32~4MIC,添加的量为50μl,加入肉桂醛的浓度为1/32~4MIC,添加的量为50μl,第9列为步骤3)制备孢子悬液的生长对照孔,第10列为无菌对照孔,再将步骤3)制备的孢子悬液加入到96孔板的第1~10列,每孔加入量为100μl,后静置于35~37℃培养48~50h,观察。 |
地址 |
530021 广西壮族自治区南宁市青秀区双拥路22号 |